【摘要】目的调查甘肃地区汉族人群中白细胞介素-4-590（IL-4-590）位点单核苷酸多态性的分布状况并明确其与乙肝后肝纤维化(HF)发生的关系。方法采用聚合酶链式反应-序列特异性引物法结合限制性酶切片段长度多态性技术研。结果甘肃地区汉族人群中IL-4-590位点单核苷酸多态性存在TT、CT、CC三种类表现型。

　　关键词肝纤维化白细胞介素-4基因多态性乙型肝炎

　　1.研究对象和材料：

　　1.1研究对象：2010年7月至2011年6月在兰州大学第一医院感染科就诊的甘肃汉族乙肝后HF患者共133例，其中男性95例，女性38例，年龄自19～81岁，平均年龄48.12±13.71岁；其中经病理组织确诊43例，经B超诊断90例。

　　1.2纳入与排除标准：纳入血清HBsAg阳性6个月以上，HF指标升高并经B超或病理组织检查诊断为HF者。

　　2.试剂和仪器

　　2.1主要试剂：DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒、PCR引物、DNAMarker、5*PBS缓冲液、EB、聚丙烯酰胺等均购自上海生工生物工程有限公司；HF四项放射免疫试剂盒购自上海海研医学生物技术有限公司。

　　2.2主要仪器：GeneAmpPCR2400扩增仪（美国PE公司）；DYY-Ⅲ-8B电泳仪；WD-9403C型紫外透射反射仪；BioRadGelDoc1000紫外凝胶成像系统；LG15-W高速离心机。

　　3.实验方法

　　3.1采集外周血3ml提取外周血单个核细胞DNA

　　3.2采用聚合酶链式反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)、限制性酶切片段长度多态性技术(RFLP)分析IL-4-590位点的多态性。

　　3.3聚丙烯酰胺凝胶电泳，以未经过酶切的PCR产物判断基因的碱基数，据此，根据酶切后不同的产物判断IL-4基因590位点的多态性。

　　3.结果

　　1.IL-4-590位点基因多态性PCR检测结果

　　结果显示，IL-4基因-590位点多态性分析PCR产物为203bp。IL-4基因-590位点为T时不能被AvaⅡ酶切，仍为203bp；如IL-4-590位点T变成C则可被AvaⅡ酶识别，酶切产生182bp和21bp两个片段，182bp片段在12%PAGE清晰可见，21bp太小不能见；如果是杂合子则可见203bp和182bp两种条带。

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