裂叶马兰无性系建立的研究(2)

人气指数:点发布时间:2013-10-24 11:00 来源：http://www.zgqkk.com 作者：刘宏森等

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　　1.2.5试管苗的移栽与定植将第5代生根继代增殖培养的试管苗培养瓶瓶塞除掉，置于日光温室中炼苗3d。之后，将700株试管苗移栽到上半层为河沙、下半层为园土的温室营养钵中。

　　把在温室营养钵中移栽成活的试管苗，于5月中旬定植到水库旁的山坡草地上，共定植400株。

　　2结果与分析

　　2.1不同浓度细胞分裂素与NAA、2，4-D对嫩茎段愈伤组织诱导培养的影响

　　培养到66d时进行诱导影响统计观察，结果由表1可见，在不同浓度细胞分裂素与不同浓度的NAA、2，4-D的培养基上，均可不同程度地诱导培养出愈伤组织，但其效果差异较大。从诱导2.2不同浓度6-BA、ZT和KT与不同浓度的NAA、IBA对愈伤组织分化培养的影响

　　培养到60d时进行统计观察，结果如表2所示。在愈伤组织的分化培养试验中，在加入细胞分裂素KT的培养基上，愈伤组织不分化；在加入生长素IBA的培养基上，愈伤组织也不分化；其效果较理想的是不同浓度ZT与NAA的培养基上，其中最好的是在ZT0.8mg·L-1与NAA0.1mg·L-1配合使用的培养基上，不仅培养的愈伤组织分化率最高，达到了96%，并且每块培养的愈伤组织接种后每11d观察统计记录一次生根情况，生根培养33d时观察统计结果证明：1/2MS+蔗糖20g·L-1+NAA0.6mg·L-1是裂叶马兰不定芽生根培养的理想培养基。在这种培养基上，经过33d的培养，就会培养出1代生根率99%、试管苗平均高度5.2cm、具有8.3个叶片、茎粗0.21cm、外观上生长旺盛的试管苗。观察还表明，在这种培养基上培养至第5d时可见有的培养材料开始生根。之后，生根率、根长、根数都不断增加。初期生长的根为白色，后期为绿色。

　　2.4试管苗生根继代增殖培养

　　连续5代生根继代增殖培养的统计观察结果证明：每一代的繁殖周期为31d、繁殖系数为3.2、生根率为99.2%，并且外观上试管苗根系均为绿色、生长非常旺盛。按照31d的繁殖系数为3.2的繁殖速度计算，1株试管苗1年至少能保证繁殖出50万株试管苗。这种繁殖速度完全能满足保护野生资源和栽培对裂叶马兰种苗的需求。这也说明：1/2MS+蔗糖20g·L-1+NAA0.6mg·L-1也是裂叶马兰试管苗生根继代增殖培养的适宜培养基。

　　2.5试管苗的移栽与定植

　　移栽后36d统计证明：移栽成活671株，成活率为95.9%。

　　定植后42d统计显示：定植成活392株，成活率98.0%。定植成活的试管苗当年9月开花、10月结果，保持了野生裂叶马兰的所有植物学性状。

　　3讨论

　　在本研究中无生长点嫩茎段诱导培养的愈伤组织和继代增殖培养的愈伤组织，是在相同的条件下进行的。但是，后者经过58d为一个培养周期培养的愈伤组织与前者经过65d为一个培养周期培养的愈伤组织相同，后者的培养周期缩短7d。之所以会产生着这种现象是由于以下原因引起的：一是前者使用的材料是无菌茎段，在剪切和灭菌中受到了损伤，接种到培养基上需要一段恢复时间；二是前者原来是在野外的土壤上生长的，将其转移到培养基上进行人工培养需要有一个适应性过程，而后者是在相同的条件下和相同的培养基上生长的，不需要这个适应过程。

　　在本研究中的不定芽生根培养的试管苗和生根继代增殖培养的试管苗，均可生长出绿色的根系。在培养基中形成绿色的根系说明，试管苗根系也能进行光合作用，对培养环境具有很强的适应性。在前人的研究中，有时会出现试管苗根系发黑的现象[11-12]，这往往是由于培养基中缺氧，根系产生无氧呼吸造成的。而试管苗形成的绿色根系，在进行光合作用时必然产生氧气，有利于试管苗根系代谢活动获得所需要的氧气，从而促进试管苗的旺盛生长。

　　参考文献：

　　[1]中国科学院北京植物研究所.中国高等植物图鉴（第四册）[M].北京：科学出版社，1975：419.

　　[2]李书心.辽宁植物志（下册）[M].沈阳：辽宁科学技术出版社，1991：4501.

　　[3]韩全忠，王正兴.大连地区植物志（下册）[M].大连：大连理工大学出版社，1993：730-731.

　　[4]南京中医药大学编著.中药大辞典（下册）[M].上海：上海科学技术出版社，2006：384-385.

　　[5]李岩，吴延君.野生山马兰组织培养和快速繁殖[J].植物生理学通讯，2002，39（6）：580.

　　[6]石丽敏，陈劲松，杨寅桂，等.野生蔬菜马兰的离体培养与快速繁殖[J].植物生理学通讯，2007，43（1）：113.

　　[7]文国琴，何道文.马兰组织培养与植株再生[J].亚热带植物科学，2005，34（4）：64.

　　[8]徐秀芳，张海洋.野生马兰的组培快繁技术研究[J].长江蔬菜，2008（5）：36-37.

　　[9]曾建军，欧阳群，李晓红，等.车前不定芽直接诱导及再生体系的建立[J].安徽农业科学，2008，36（5）：1810-1811.

　　[10]李小平，朱培林，曾志斌，等.车前栽培技术及相关研究进展[J].江西林业科技，2006（4）：44-48.

　　[11]安利佳，姜长阳.植物组织培养导论[M].大连：辽宁师范大学出版社，1996：105-117.