将自然发病田中采集带回的病果剥开，直接挑取菌丝置于选择性培养基平板上，25～28 ℃恒温培养。待选择性培养基上长出白色菌落后，挑取菌落边缘菌丝尖端于CA斜面上进行纯化。采用灌根法把辣椒疫霉菌回接到辣椒植株，选取表现出与田间症状相同的菌落，再分离后选取其中的8个菌株（表1）进行鉴定[1，2]。

　　1.4  辣椒疫霉菌的鉴定

　　在超净工作台上将培养在CA培养基上生长较好的菌丝分别接种在培养基①-⑤上，设置6个温度，分别为8、15、25、30、35、40 ℃，每个处理3次重复。接种6 d后，调查病原菌菌落的生长直径，观察菌落、菌丝、孢囊梗、孢子囊等形态特征。挑取CA培养基上的菌丝块于Petri液中，室温下光照24 h可产生大量孢子囊。挑取产生孢子囊的菌丝块于试管中，加水l mL，用力摇晃5 min，观察孢子囊的脱落情况，测量孢子囊大小和乳突高度[3，4]。

　　1.5  辣椒疫病的抗性鉴定

　　分别将8个供试菌株用无菌水配制成孢子悬浮液，接种浓度为1 000 CFU/mL，接种4个供试辣椒品种，每品种3个重复。接种采用灌根法，接种量5 mL/株。接种后保持土壤湿润，温度控制在25 ℃左右，6 d后调查各处理的发病情况[5，6]。按病情分级标准调查植株的发病情况[7，8]。

　　1.6   病情分级及抗性评价标准

　　病情划分为6级。0级：无病斑;1级：病斑面积占叶面积的10%以下;2级：病斑面积占叶面积的10%～20%;3级：病斑面积占叶面积的20%～30%;4级：病斑面积占叶面积的30%～50%;5级：病斑面积占叶面积的50%以上。

　　病情指数=Σ（各级病叶数×相对级值）/（调查总叶数×最高级值）×100。

　　抗性划分：高抗（HR）：病情指数0～5;抗病（R）：病情指数5～15;中抗（MR）：病情指数15～30;中感（MS）：病情指数30～50;感病（S）：病情指数50～70;高感（HS）：病情指数大于70。

　　2  结果与分析

　　2.1  贵州省辣椒疫霉菌生物学特性

　　2.1.1  不同培养基上的菌落形态特征  25 ℃条件下培养，供试菌株在CA、PDA、RMA、CMA、OMA培养基上表现相近，2～3 d即可形成洁白而丰满的圆形菌落，尤以在CA培养基上菌丝浓密，生长较快。不同培养基上的P1菌株的菌落形态见表2。

　　2.1.2  不同温度下菌丝的生长情况  辣椒疫霉菌菌株在不同温度下菌落的生长情况见表3。8个菌株在15～35 ℃的范围内均能生长，最适温度为25～30 ℃，8 ℃和40 ℃都不能正常生长，但是8 ℃的低温只是抑制了菌丝生长，并没有使菌株致死。

　　2.1.3  孢子囊的形态特征  8个菌株在各培养基上都能产生成熟的游动孢子囊，孢子囊形态变化不大，多为圆形、长椭圆形、不规则形等，绝大多数为单乳突，偶有双乳突出现。在CA培养基上诱导的孢子囊的平均长度为33.5～48.4 μm，宽度为25.5～31.5 μm，长宽比（L/B）为1.2～1.8，柄长为29.4～36.2 μm，乳突高为4.7～6.3 μm（表4）。

　　2.2  室内叶片抗性鉴定及品种间的抗性差异

　　由辣椒疫病室内抗性鉴定结果（表5）可以看出，供试的8个辣椒疫霉菌菌株对4个辣椒品种均有一定的致病性，菌株总体致病力由强到弱P6、 P3、P1、P5、P7、P2、P4、P8，辣椒品种总体抗疫病性由强到弱的顺序为小米椒、遵义辣椒、花溪辣椒、朝天椒。

　　3  小结与讨论

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