1.2.3 游离脯氨酸（Pro）含量测定 采用酸性茚三酮方法测定[7]。称取不同处理混匀的叶片0.5 g，分别置于带塞的试管中，每个处理重复3 次，取平均值。从标准方程中求出提取液中脯氨酸含量，按照公式计算出叶片脯氨酸含量。

　　脯氨酸含量（mg/g）=[提取液中脯氨酸质量（mg）×提取液总体积（mL）×1000]/[测定时所吸取提取液的总体积（mL）×样品质量（g）]。

　　1.3 数据处理

　　采用DPS 软件将温度（t） 和相对电导率（y） 用Logistic方程y=k/（1+ae-bt）进行拟合，求出相对电导率的拐点温度，即为低温半致死温度（LT50）[8]。用单因素方差分析处理组间的差异。

　　2 结果与分析

　　2.1 不同低温胁迫对相对电导率的影响

　　由表1可见，随着温度降低，不同来源淡竹的相对电导率均出现不同程度的增加。来源于江西、浙江和江苏的淡竹在温度达-15℃ 时相对电导率急剧上升， 分别比-10℃ 时增加98%、130%和98%，而来自山东日照、沂源、东营、济南、潍坊、临沂、胶南和泰安的淡竹则在温度到达-20℃时相对电导率才出现急剧上升，增幅达60%以上，当温度下降到-25℃时， 烟台昆嵛山淡竹相对电导率达到61.96%，而烟台林科院新种质淡竹依然保持平稳的相对电导率， 只有47.87%。可见，烟台林科院淡竹耐寒性最强，其次是烟台昆嵛山淡竹，来自江西 、浙江和江苏的淡竹耐寒性最差。测定结果作方差分析，不同区域间淡竹和温度处理间相对电导率差异达5%显著水平，可见不同区域之间随着温度的降低耐寒性表现出很大的差别。区域间多重比较结果显示，耐寒性之间的差异主要表现在烟台林科院淡竹和江西淡竹、浙江淡竹、江苏淡竹及其它区域之间（表略）。

　　Logistic方程是一个典型的“S”曲线方程，淡竹叶片相对电导率随温度的变化呈“S”型曲线，利用相对电导率拟合Logistic方程求出植物组织的低温半致死温度（LT50），见表1。结果表明，不同来源的淡竹抗寒性有一定的差异，LT50越高，抗寒性越弱，LT50越低，抗寒性越强。从半致死温度所反映的淡竹耐寒性强弱来看，烟台林科院淡竹半致死临界温度为-26.78℃，耐寒性最强，烟台昆嵛山淡竹半致死临界温度为-23.86℃，耐寒性较强，浙江淡竹半致死临界温度为-15.76℃，耐寒性最弱，其次江西淡竹半致死临界温度为-16.18℃，耐寒性较弱。

　　2.2 低温胁迫对淡竹叶片游离脯氨酸含量的影响

　　由图1可见，0℃时供试的13个区域淡竹叶片的游离脯氨酸含量无明显差异，随着温度的降低，游离脯氨酸的含量开始升高，当温度降至-10℃时，除烟台林科院淡竹外，其它淡竹叶片游离脯氨酸含量均上升到最大值，济南淡竹叶片游离脯氨酸含量最高为1.24 mg/g，其次是潍坊和烟台昆嵛山淡竹，分别为1.13 mg/g 和1.12 mg/g。当温度降至-15℃时，烟台林科院淡竹叶片游离脯氨酸含量达到最大值1.52 mg/g，其余淡竹叶片游离脯氨酸含量下降为最小值。随着温度继续降低，游离脯氨酸含量均继续回升，当温度达到-25℃时，所有淡竹的游离脯氨酸含量较0℃时均有所增加，增幅较大的是来自烟台林科院、潍坊、日照、东营、胶南、沂源和烟台昆嵛山的淡竹；增幅较小的是来自江西、浙江和江苏的淡竹。对不同处理温度下的淡竹叶片游离脯氨酸含量进行方差分析，结果表明， Sig.=0.018<0.05，且FA=6.727>F0.05=1.195，不同温度处理间淡竹叶片游离脯氨酸含量差异显著； Sig.=0.000<0.01，且FB=18.991>F0.01=4.219，不同区域间淡竹叶片游离脯氨酸含量差异极显著。烟台林科院淡竹叶片游离脯氨酸含量平均值最大，其次是潍坊和烟台昆嵛山淡竹；江西淡竹和浙江淡竹最小，来自日照、沂源、济南、东营、潍坊、胶南、泰安、烟台昆嵛山、临沂的淡竹叶片游离脯氨酸含量平均值间差异不显著，但显著低于烟台林科院淡竹 （表略）。

　　3 结论与讨论

　　目前，竹类植物抗寒性的调查局限于外观形态的研究，要想真正了解不同区域淡竹的生长极限温度，确定其适宜生长范围，还必须从抗寒生理机理内部因素进行研究。低温引起细胞膜透性发生变化，是植物低温伤害的一个重要原因[5]。生物膜结构的变化是研究抗寒机理的重要问题，膜的性质、结构和相变是寒害原初反应的重要指标，而在遗传基因控制范围内，膜脂成分的不饱和度以及细胞质黏度和流动性可作为抗寒性强弱的重要生理指标[9]。一般膜透性与抗寒性的关系可通过植物低温处理后的电解质渗出率来反映，也是目前研究测定植物抗寒性的最常用的试验方法。进行细胞膜透性和抗寒性的关系研究以及其动态变化，可以从细胞膜方面揭示竹类植物抗寒性的机理[10，11]。徐传保等[12]采用电解质外渗率评价4种淡竹的抗寒性，结果表明，4种竹子抗寒性的强弱顺序与形态观察结果完全一致，采用电解质外渗率评价竹子抗寒性结果较稳定。本试验中，在0℃至-15℃温度胁迫下淡竹叶片的相对电导率变化比较平缓，在-25℃低温胁迫下急剧上升，表明胁迫温度越低，细胞受伤害越重。这与黄程前等[13]报道的低温胁迫20种观赏丛生竹的抗寒性测定结果一致，张志[14]在温度胁迫早熟禾的研究中也得到相同的结果。王永红等[15]研究结果表明电解质外渗率与低温胁迫山茶叶片褐变所表现的规律较吻合，证明电解质外渗率反映山茶物种耐寒性强弱较为客观真实。上述诸多研究结果说明，电解质外渗率可以作为判断植物抗寒力强弱的重要指标。在低温胁迫下，相对电导率与温度之间的关系曲线，能较好地用Logistic曲线方程y=k/（1+ae-bt）进行拟合，计算出不同区域淡竹的半致死温度。从半致死温度来看，本试验13个区域淡竹的抗寒性强弱顺序为：烟台林科院>烟台昆嵛山>潍坊>临沂>日照>胶南>东营>济南>泰安>沂源>江苏>江西>浙江。

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