摘要：为了获得山葵愈伤组织诱导和增殖的最佳培养条件，选择山葵真叶片、真叶柄和胚轴为外植体，以MS为基本培养基，配以不同浓度的2，4-D和6-BA植物激素进行愈伤组织诱导，并将诱导的愈伤组织接种于增殖培养基中进行培养。结果表明：诱导山葵愈伤组织的最佳培养基配方为MS+4 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA，培养25 d后真叶片、真叶柄、胚轴的愈伤组织诱导率分别为（100.0±0.00）%、（60.5±3.29）%、（62.5±3.74 ）%；山葵胚轴外植体产生的愈伤组织增殖倍数最高，培养35 d后的愈伤组织增殖倍数可达（2.48±0.93）倍。
　　关键词：山葵；愈伤组织；配方；外植体；诱导率；增殖倍数
　　中图分类号： S567.23+9.043文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）01-0053-02
　　山葵（Wasabia japonica）别称山嵛菜，为十字花科山嵛菜属多年生草本半阴生植物，原产中国和日本，被誉为“绿色黄金”[1-2]。山葵具有强烈的辛辣味及特殊的芳香，不仅具有很强的杀菌和助消化功能[3]，而且能促进淀粉性食物的消化，稳定胃肠中的维生素C和消灭消化道中的寄生虫，具有很好的防病治病作用[4-5]。目前山葵多采用分株繁殖和种子繁殖，分株繁殖存在品种退化、繁殖系数低和种苗带菌等问题，极易导致病害大面积发生[6]。种子繁殖具有速度快、 数量多和能部分减少病害发生的特点，但是由于山葵种子属顽拗性种子，失水过多极易导致种子活力丧失，因此常采用低温高湿保存；同时，山葵种子存在休眠，需有效破除休眠才能促使种子尽快萌发[7-9]。本研究采用植物组培快繁技术，通过筛选培养基配方和外植体种类，以获得山葵愈伤组织诱导的最佳条件，为山葵后续的生物学研究奠定基础。
　　1材料与方法
　　1.1试验材料
　　山葵种子采自四川省广元市；试验材料山葵植物的真叶片、真叶柄、胚轴外植体均取自山葵种子萌发所得的幼苗。
　　1.2试验方法
　　1.2.1外植体消毒和培养选取山葵种子萌发25 d的幼苗，取其真叶片、真叶柄和胚轴外植体，将其放在超净工作台上用浓度为0.1 g/L的氯化汞消毒处理3 min后，用无菌水清洗5次，再用无菌滤纸吸干材料表面的水分，将其接入愈伤组织诱导培养基中。
　　1.2.2培养基和培养条件愈伤组织诱导培养基以MS为基本培养基，激素6-BA 的浓度均为0.5 mg/L，2，4-D 的浓度设定为0、2、4、6、8 mg/L，分别记作A1、A2、A3、A4、A5处理；在20 ℃、12 h/d的光照时长、2 000 lx的光照强度条件下培养25 d后统计各外植体的愈伤组织诱导率。
　　1.2.3不同外植体诱导的愈伤组织增殖选取由山葵真叶片、真叶柄、胚轴外植体诱导产生的愈伤组织，接种于MS+2 mg/L NAA +0.3 mg/L 6-BA培养基中，分别记作B1、B2、B3处理，在20 ℃、10 h/d光照时长、1 800 lx的光照强度条件下增殖培养35 d后统计其愈伤组织的增殖倍数。
　　1.3数据统计及计算公式
　　上述试验均重复3次，数据用SPSS 13.0 统计学软件进行方差分析，并采用新复极差（Duncans）法进行多重比较，P<0.05 为显著性差异，P<0.01为极显著性差异，数据统计结果以“x±s”表示。愈伤组织的诱导率、增殖倍数的计算公式如下：愈伤组织诱导率=（诱导出愈伤组织的外植体数/接种的外植体数）×100%；愈伤组织的增殖倍数 = 收获时质量/接种时质量。
　　2结果与分析
　　2.1山葵不同部位外植体的愈伤组织诱导
　　由表1可知，随着2，4-D浓度增高，山葵真叶片、真叶柄、胚轴的愈伤组织诱导率均呈现先提高后降低的趋势；其中未添加2，4-D激素的A1处理，即培养基配方为MS+0 mg/L 2，4-D+0.5 mg/L 6-BA，均不适宜山葵各外植体的愈伤组织诱导，3 种外植体的愈伤组织诱导率均为最低，真叶片的愈伤组织诱导率为（37.5±2.73）%，真叶柄为（0.0±000）%，胚轴为（0.0±0.00）%。由此说明，在培养基中添加生长素2，4-D对山葵愈伤组织的诱导非常重要。培养基配方为MS+4 mg/L 2，4-D +0.5 mg/L 6-BA的A3处理，最适宜3种外植体的愈伤组织诱导，愈伤组织的诱导率均为最高，真叶片的愈伤组织诱导率为（100±0.00）%，真叶柄为（60.5±3.29）%，胚轴为（62.5±3.74）%。然而，随着2，4-D浓度进一步升高到6 mg/L 以上时，山葵各外植体的愈伤组织诱导率均呈现出下降趋势，以2，4-D浓度升高到8 mg/L 时的各外植体愈伤组织诱导率下降最为显著，其中真叶柄外植体的愈伤组织诱导率降低了35.5百分点，表明针对不同的植物，选择适宜的2，4-D浓度显得尤为重要。表1山葵不同部位外植体的愈伤组织诱导
　　处理编号激素浓度配比（mg/L）愈伤组织诱导率（%）2，4-D6-BA胚轴真叶片真叶柄A100.50.0±0.0037.5±2.730.0±0.00A220.525.0±2.3487.5±2.1612.5 ±1.78A340.562.5±3.74100.0±0.0060.5±3.29A460.550.2±1.5787.5±1.7537.5 ±2.13A580.537.5±1.6362.5±1.2625.0±1.46

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