2结果

　　2.1细胞活性的检测在细胞处理48h后，应用MTT检测与正常培养的神经细胞相比，正常培养的神经细胞+巨噬细胞上清液组细胞的活性明显下降，仅为正常培养神经细胞的28.35%；说明神经细胞在巨噬细胞培养上清（经Aβ活化后）的作用下引起细胞的大量死亡。而在正常培养的神经细胞+巨噬细胞上清液+200μmol/L的绿原酸组，细胞活性为正常培养神经细胞的75.82%，说明在加入绿原酸后，能明显减少神经细胞的死亡起到保护神经细胞的作用。在正常培养的神经细胞+10μmol/LAβ组，神经细胞的活性为正常培养细胞的91.27%，说明在正常培养的神经细胞中，虽然经过了纯化处理，但仍存在一定的胶质细胞，在Aβ活化后，引起一定神经细胞死亡。

　　2.2微管相关蛋白-2表达在细胞处理48h后，收集细胞，应用westernblot检测，从结果可见，在正常培养的细胞中，MAP-2明显的高表达，但在细胞中加入经Aβ处理的巨噬细胞上清后，MAP-2的表达明显下降，仅为正常组的31.23%（P<0.01）。在加入巨噬细胞上清的同时加入绿原酸后，MAP-2的表达升高明显，达到79.77%（P<0.01），但与正常比还有一定的差距（P<0.05），而在正常细胞+Aβ组，MAP-2的表达仅略有下降（表1，图1）。

　　MAP-2在1组中明显的高表达，但在2组中下降明显，在三组，表达又有显著的上升，在4组中，仅较1组略低。条带1：正常培养的神经细胞；条带2：正常培养的神经细胞+巨噬细胞上清液；条带3：正常培养的神经细胞+巨噬细胞上清液+200μmol/L的绿原酸；条带4正常培养的神经细胞+10μmol/LAβ

　　2.3乳酸脱氢酶检测在正常培养的神经细胞中，乳酸脱氢酶的量只有802nkat/L，但在正常培养的神经细胞+巨噬细胞上清液组中，乳酸脱氢酶漏出量显著升高，达到3046nkat/L，说明神经细胞在加入经Aβ诱导后的巨噬细胞的培养上清液后，大量的神经细胞受损，导致大量的乳酸脱氢酶的漏出，而同时加入绿原酸后，在很大程度上可以减少由巨噬细胞上清液引起的神经细胞膜的损伤，对神经细胞起到明显的保护作用（表2）。

　　3讨论

　　阿尔茨海默病是以进行性痴呆为主要临床特征的神经系统退行性疾病，其病理特征是大脑皮质和海马区域出现神经元缺失、神经炎性斑块和神经原纤维缠结。阿尔茨海默病造成神经元丧失的主要机制是细胞凋亡。许多学者研究表明，Aβ对神经细胞没有直接毒性作用，在纯海马神经细胞培养中加入Aβ，并未出现对神经细胞的杀伤作用[4]。作者对此也进行了初步研究，单独培养的神经细胞中加入Aβ，只见少量的神经细胞死亡，而经Aβ孵育的巨噬细胞的上清液能引起大量的神经细胞凋亡。这些结果表明，Aβ通过激活巨噬细胞，使其释放一些细胞因子，进一步导致神经细胞的凋亡。在单独培养的神经细胞中也出现少量的细胞凋亡，因为在培养神经细胞的过程中即使加入阿糖胞苷，以抑制胶质细胞的生长，但神经细胞不能达到完全纯化，胶质细胞仍存在一定的活性。因此实验中采用Aβ预处理巨噬细胞，再将上清液加入神经细胞培养基中用以模拟体内的生理状态。

　　绿原酸是从中药杜仲中提取出来的主要活性成分。具有抗炎、抗氧化、抑制氨基酸代谢等药理作用[5]。它能直接对抗炎症介质的作用，降低炎症组织中前列腺素E2的释放量，抑制炎症渗出，从而抑制随后产生的炎症反应。有研究报道，绿原酸的抗炎作用的位点可能是小胶质细胞。本实验结果显示，加入绿原酸组的乳酸脱氢酶漏出量较Aβ预处理巨噬细胞上清组明显减少，对Aβ引起的神经细胞膜损伤具有保护作用；MAP-2是细胞骨架中微管的重要组成成分之一，是神经细胞中的标志性微管相关蛋白，分布于胞体、树突及轴突中。MAP-2可反映神经细胞的存活状态和功能，其变化可代表神经细胞病变。应用经Aβ预处理的巨噬细胞上清可引起神经细胞的微管相关蛋白-2表达明显减少；但在加入巨噬细胞上清液的同时加入绿原酸后，小脑颗粒细胞MAP-2表达明显增加，说明绿原酸能够抑制Aβ引起的神经细胞膜损伤和神经细胞的死亡，对神经细胞具有保护作用。

　　参考文献：

　　[1]王抒，孙兰，杜冠华.p38MAPK—控制阿尔采末病进程的新靶点[J].中国药理学通报，2004；20（5）：595-8.

　　[2]刘军，刘岚，曹志中，等.肿瘤坏死因子对创伤后牙髓组织修复的调节作用[J].中国临床康复，2004.8（5）：860-1.

　　[3]乌兰，张泽生.金银花中绿原酸的提取及检测[J].食品科学，2011，29（6）：130-134.

　　[4]戚向阳，张声华，陆彩玲等.杜仲叶中绿原酸的提取分离研究[J].中草药，2009，19（11）：741-742.

　　[5]马希汉，尉芹，景谦平.杜仲叶提取绿原酸的中间试验研究[J].林产化学与工业.2011.35（03）：73-76.

---

期刊库（http://www.zgqkk.com），是一个专门从事期刊推广、投稿辅导的网站。
　　本站提供如何投稿辅导，寻求投稿辅导合作，快速投稿辅导，投稿辅导格式指导等解决方案：省级投稿辅导/国家级投稿辅导/核心期刊投稿辅导//职称投稿辅导。

---

　　【免责声明】本文仅代表作者本人观点，与投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站无关。投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。