作者：彭红， 付建武， 周玉春， 黄丽芸
【摘 要】 目的研究川芎药材极性部分高效液相色谱(HPLC)指纹图谱测定方法。方法以阿魏酸为对照，采用Eclipse XDB-C18(ODS-2, 250 mm×4. 6 mm, 5 μm)色谱柱，流动相为甲醇-1%醋酸梯度洗脱，流速 1.0 ml/min，柱温25℃，检测波长298 nm。结果共确定10个共有峰，其中7号峰为阿魏酸峰，为该指纹图谱的参照峰。供试品溶液的指纹图谱与对照指纹图谱中的全部10个共有峰对应，且顺序一致。结论实验方法简单、准确，研究所得的川芎指纹图谱稳定性、重复性好 ，可作为川芎极性部分的特征性指纹图谱。
【关键词】 川芎; 指纹图谱; 高效液相色谱
Abstract：ObjectiveTo study the detection methods with fingerprint chromatogram for polar parts of Chuanxiong Rhizome.MethodsWith ferulenol as the reference substance, Eclipse XDB-C18(ODS-2, 250 mm×4. 6mm, 5μm)was used as the chromatographic column.The mobile phase was methanol and 1% HAC, the temprature was 25℃,the flow rate was 1.0 ml/min,and the wavelength was 238 nm.Results There were 10 peaks ,of which the seventh was the ferulenol peak,the reference peak.The ten peaks also existed in the sample just as in the reference solution,whose order was corresponded. ConclusionThe method is simple and accurate with good reproducibility and stability and can be used as the polar characteristic fingerprint atlas.
Key words： Chuanxiong Rhizome; Fingerprint chromatogram; HPLC
川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎，用于血淤气滞所致的月经不调、痛经闭经，肝郁气滞而致血行不畅的胸胁疼痛，风寒湿痹 ，跌打肿痛,头痛，风湿疼痛[1]，近年来,临床常用于治疗冠心病、心绞痛，缺血性脑血管病等心血管疾病和妇科疾病。根据国家药品监督管理局在2000年颁发《中药注射液指纹图谱研究的技术要求(暂行)》(国药管注[2000]348号)[2] ，本实验运用指纹图谱相似度评价软件，对川芎药材进行了指纹图谱研究和比较研究。现报道如下。
1 器材
Agilent 1200 高效液相色谱仪(DAD检测器， VWD检测器);阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110773-200611);川芎药材(北京鹤元堂医药科技有限公司，批号：20061003)经江西中医学院中药鉴定教研室褚小兰老师鉴定;甲醇为色谱纯，其他的均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件谱柱为Eclipse XDB-C18(ODS-2, 250 mm×4.6 mm, 5 μm)，流动相为甲醇-1%醋酸梯度洗脱(见表1)，流速1.0 ml/min，柱温 25℃，以阿魏酸为对照品，检测波长298 nm。表1 梯度洗脱
2.2 对照品溶液的制备选取川芎药材中的主要成分之一阿魏酸为参照物，加甲醇定容使成每毫升含阿魏酸44μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备精密称取川芎药材粉末2.0 g，置于具塞锥形瓶中，加体积分数为95%乙醇50 ml,放置过夜，超声提取20 min，过滤，挥干溶剂后加20 ml水溶解，再分别以20，20，10 ml醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液，挥干，残渣加甲醇溶解并定容至10 ml容量瓶中，经0.45 μm微孔滤膜过滤,即得。
2.4 精密度实验取同一批样品，连续进样测定5次，计算相似度在0. 99以上，精密度良好。结果见图1。
2.5 重复性实验取同一批样品，制备供试品溶液5份，分别进样测定，计算相似度在0. 99以上，重复性良好。结果见图2。
2.6 稳定性实验取同一批样品，制备供试品溶液，分别在0, 4, 8, 16, 24 h进样测定，计算相似度在0.99以上，稳定性良好。见图3。
2.7 样品的测定精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定。供试品色谱图导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，与对照指纹图谱比较，计算相似度，即得。
供试品色谱图与对照指纹图谱比较，相似度不得小于0.9。指纹图谱见图4。
本指纹图谱共确定10个共有峰，其中7号峰为阿魏酸峰，为本指纹图谱的参照峰。供试品溶液的色谱图具有对照指纹图谱中的全部10个共有峰，且顺序一致。各峰保留时间及相对峰面积见表2。表2 10个共有峰的保留时间及相对峰面积
按照正文方法共测定了5批样品，批号分别为01～05，色谱图导入指纹图谱相似度计算软件，以批号01的样品图为参照，时间窗0.2，对照谱生成方法为平均数，共选择了如图5的10个色谱峰进行自动匹配，并确定这10个峰为川芎药材的特征峰。生成对照谱的匹配数据见表3。表3 生成对照谱的匹配数据
3 讨论
通过测定，我们将川芎的指纹图谱评价标准定为 10个特征峰，其中7号峰为阿魏酸。
从这 10批样品的高效液相色谱指纹图谱中可以看到，不同产地、不同采集时间的川芎样品，以及云南产川芎样品的指纹图谱，与川芎对照药材相比较指纹图谱的相似度都在90% 以上，这说明所研究的川芎指纹图谱具有比较好的稳定性和重复性。在本文条件下，川芎的指纹图谱具有较好的特征性，可作为川芎极性部分专属性的指纹图谱。
【参考文献】
[1] 国家中医药管理局 《中华本草》编委会.中华本草，第5卷，第1版[M].上海：上海科学技术出版社，1995：976.
[2] 国家药品监督管理局.中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)[J].中成药，2000，22(10)：671.
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