Marker 空白 阴性 a b c

　　GAPDH（590bp）

　　VEGFR-3（261bp）

　　A

　　B

　　A：VEGFR-3siRNA/PEI转染LEPCs48h各组VEGFR-3mRNA的表达。B：统计学结果siRNA a组、siRNA b组、siRNA c组与空白转染组和阴性转染组比较有统计学意义，#P<0.05，*P<0.01，siRNAa组与siRNAb组、siRNAc组比有统计学意义P<0.05

　　图1 半定量RTPCR结果分析

　　2.2.2 Western blot检测结果分析 转染各组细胞VEGFR-3蛋白表达结果显示，空白与阴性转染组之间无差异siRNA a组、siRNA b组、siRNA c组与空白转染组和阴性转染组比较均有显著差异，其中siRNA a组抑制效率最高（图2）。此结果在蛋白水平上符合半定量RT-PCR的实验结果。

　　空白 阴性 a b c

　　VEGFR-3165KD

　　β-actin 43KD

　　C

　　D

　　C：VEGFR-3siRNA/PEI转染LEPCs72h各组VEGFR-3蛋白的表达。D：统计学结果siRNA a组、siRNA b组、siRNA c组与空白转染组和阴性转染组比较有统计学意义，#P<0.05，*P<0.01，siRNAa组与siRNAb组、siRNAc组比有统计学意义，P<0.05

　　图2 Westem blot 检测结果

　　3 讨论

　　在肿瘤转移过程中，肿瘤细胞可经新生的淋巴管转移[11]，抑制肿瘤淋巴管新生对肿瘤治疗至关重要。LEPCs参与肿瘤淋巴管新生已成为研究热点[12]。LEPCs可迁移和定居到肿瘤，参与肿瘤淋巴管新生[3，13-14]。关于LEPCs参与淋巴管新生的机制尚未完全明确。本实验在体外将VEGFR-3siRNA转染入LEPCs。裸siRNA分子易降解且靶向性差，目前多采用借助载体给药，阳离子聚合物具有较低的免疫原性和细胞毒性多被应用于研究[15]。PEI是一种被广泛用于DNA和siRNA等的阳离子聚合物载体，通过形成纳米粒包裹siRNA后给药[16]。

　　本研究采用分子量为25KDa的PEI为载体介导VEGFR-3siRNA的转染，成功转染VEGFR-3siRNA进入LEPCs内，用RT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白质表达，证实了VEGFR-3siRNA对靶基因VEGFR-3的沉默效果。说明通过利用RNAi技术能够在体外靶向抑制LEPCs VEGFR-3的表达，进而干扰VEGF-C/VEGFR-3信号途径，抑制其分化和淋巴管新生。如果以体外实验结果作为基础，将VEGFR-3siRNA导入LEPCs并靶向于肿瘤，可能会抑制淋巴管新生引起的肿瘤转移。

　　[参考文献]

　　[1] Wang H，Tan Y，Zhang M，et al.Vascular endothelial growth factor-C induced differentiation of CD34+ CD133+ VEGFR-3 EPCs towards lymphatic endothelial cells[J].Jpn J Lymphol，2005，28（2）：71-73.

　　[2] Salven P，Mustjoki S，Alitalo R，et al.VEGFR-3 and CD133 identify a population of CD 34+ lymphatic/vascular endothelial precursor cells[J].Blood，2003，101（1）：168-172.

　　[3] Norrmén C，Tammela T，Petrova TV. et al. Biological basis of therapeutic lymphangiogenesis. Circulation[J].2011，123：1335-1351.

　　[4] Tan YZ，Wang HJ，Zhang MH，et al.CD34+ VEGFR-3+ progenitor cells have a potential to differentiate towards lymphaticendothelial cells[J]. Cell Mol Med，2014，18（3）：422-433.

　　[5] Religa P，Cao R，Bjorndahl M，et al. Presence of bone marrow derived circulating progenitor endothelial cells in the newly formed lymphatic vessels[J].Blood，2005，106（13）： 4184-4190.

　　[6] Bogos K，Renyi-Vamos F，Dobos J，et al.High VEGFR-3-positive circulating lymphatic/vascular endothelial progenitor cell level is associated with poor prognosis in human small cell lung cancer[J].Clin Cancer Res，2009，15（5）：1741-1746.

　　[7] 王海杰，谭玉珍.淋巴管内皮祖细胞在淋巴管新生中的作用及其机制[J].解剖科学进展，2011，17（6）：593-596.

　　[8] González-González M，Rito-Palomares M，Méndez Quintero O. Partition behavior of CD133（+） stem cells from human umbilical cord blood in aqueous two-phase systems： In route to establish novel stem cell primary recovery strategies[J].Biotechnol Prog，2014，30（3）：700-707.

　　[9] Wu JH，Wang HJ，Tan YZ. et al.Characterization of rat very small embryonic-like stem cells and cardiac repair after cell transplantation for myocardial infarction[J].Stem Cells Dev，2012，21（8）：1367-1379.

　　[10] Zhang DY，Wang HJ，Tan YZ.Wnt/β-catenin signaling induces the aging of mesenchymal stem cells through the DNA damage response and the p53/p21 pathway[J].PLoS One，2011，6（6）：e21397.

　　[11] Moore XL，LU J，Sun L，et al.Endothelial progenitor cells “homing”specificity to brain tumors[J].Gene Theraphy，2004，11（10）：811-818.

　　[12] 王海杰，谭玉珍.淋巴管新生及其在疾病发生和治疗中的意义[J].解剖学报，2007，38（2）： 250-252.

　　[13] Hiasa K，Ishibashi M，Ohtani K，et al.Gene transfer of stromal cell-derived factor-1：enhances ischemic vasculogenesis and angiogenesis via vascular endothelial growth factor/endothelial nitric oxide synthase-related pathway[J].Circulation，2004，109（20）：2454-2461.

　　[14] Ingber DE. Mechanical signaling and the cellular response to extracellular matrix in angiogenesis and cardiovascular physiology[J].CireRes，2002：92（10）：877-887.

　　[15] Pecot CV，Calin GA，Coleman RL，et al.RNA interference in the clinic： challenges and future directions[J].Nat Rev Cancer，2011，11（1）：59-67.

　　[16] Goldsmith M，Mizrahy S，Peer D.Grand challenges in modulating the immune response with RNAi nanomedicines[J].Nanomedicine，2011，6（10）：1771-1785.

---

期刊库（http://www.zgqkk.com），是一个专门从事期刊推广、投稿辅导的网站。
　　本站提供如何投稿辅导，寻求投稿辅导合作，快速投稿辅导，投稿辅导格式指导等解决方案：省级投稿辅导/国家级投稿辅导/核心期刊投稿辅导//职称投稿辅导。

---

　　【免责声明】本文仅代表作者本人观点，与投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站无关。投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。