摘要：目的探讨中医药治疗艾滋病血液样本库的建库条件、样本的采集、保存、质量控制、生物安全以及信息化管理等问题。方法以云南省中医药治疗艾滋病试点项目为依托，针对纯中医药治疗1年以上、CD4升高、病毒载量降低或者持续稳定的患者作为样本拟捐赠对象，签署知情同意书，收集捐赠者血液标本，严格依照生物安全要求分离、分装，于液氮中低温冷冻保存，所有标本将采用信息管理软件规范管理，以备后续研究使用。结果已收集相关标本50余例，近300份，并将用于中医药有效治疗艾滋病的深入研究，结论艾滋病样本库的建立，有利于合理有效利用样本资源，便于深入研究中医药治疗艾滋病的作用靶点和特点，达到资源保存和共享的目的。

　　关键词：艾滋病血液样本库；建立与管理；生物安全

　　中图分类号：R512.91文献标志码：A文章编号：1007-2349（2014）09-0094-03

　　生物样本库（Biobank）也称生物信息库或生物材料和数据库，指的是长期保存的人体材料和样本，这些样本可与个人数据及有关它们供者的信息相联系或没有联系。人体组织的样本包括细胞、组织和血液以及作为遗传信息物质的DNA。经济合作与发展组织（OECD）定义为：生物样本库是一种集中保存各种人类生物材料（Human biological material），用于疾病的临床治疗和生命科学研究的生物应用系统。云南省是我国艾滋病的高发区，感染者具有多民族、多途径感染的特点，使云南省艾滋病感染者防治的研究颇具代表性。自2005年云南省中医药治疗艾滋病试点项目开展以来，截止2014年2月底，已累计治疗感染者11806例，正在治疗6791例。规范管理并长期保存依从性好、治疗有效的感染者标本，为我省、乃至全国科研工作者提供有价值的样本，是本院工作人员考虑的工作重点之一。本研究将以“珍惜样本、执行标准、充分应用、维护产权”为原则和宗旨[1]，初步建立云南省中医药治疗艾滋病生物样本库，并实施信息化管理。

　　1材料与方法

　　1.1材料海尔-80℃冰箱，金凤牌YDS-50B-125型液氮罐，贝克曼血球计数仪、生物安全柜、超净工作台、离心机、德国产2 mL冻存管，冻存管盒、淋巴细胞分离液、胎牛血清、DMSO、PBS、抗凝、促凝采血管，采血针等。

　　1.2标本的采集、分装

　　1.2.1全血：按照血液采集标准操作规程（下同），取2 mL抗凝全血直接分装于冻存管，1管/人。置入-20℃冰箱，过夜转入-80℃。

　　1.2.2血清、血浆、白细胞、红细胞分别取促凝管和抗凝管采4～6 mL全血，2200 rpm/min水平离心10 min，无菌移液器分别吸出血清、血浆、抗凝管中间白细胞层以及下层红细胞，分别装入冻存管中，1.5 mL/管，1～2管/人。

　　1.2.3外周血单核细胞（PBMC）离心后的抗凝全血，取血浆保存后，将剩余血细胞用PBS缓冲液按1：1等倍稀释，轻吹使其充分混匀后，缓缓加入有淋巴细胞分离液的离心管。加入时离心管倾斜45度角，用软吸管先浸润离心管壁，在距分离液上方1 cm处，使稀释液重叠于分层液之上（加入时勿破坏液面，并保持两界面清晰，勿冲破淋巴细胞分离液界面），水平离心机2200 rpm/min离心20 min，用无菌吸管吸取白细胞层，置另一15 mL离心管中，重复洗3次。血球计数仪计数细胞，加细胞冻存液保存于冻存管。

　　1.3样本保存所有保存样本依据编号规则确定唯一编号后，放入冻存盒置-20℃冰箱过夜，再转入-80℃，整理后放液氮罐长期保存。PBMC最好采用程序性降温盒降温后置液氮罐保存，可大大提高细胞冻存的存活率。

　　2结果

　　本研究已收集中医药治疗1年以上且有效的艾滋病血液标本共50余例，近300份，并收集血液样本捐赠者基本信息及历次生化、血常规、CD4和病毒载量等检测结果，可用于云南省中医药治疗艾滋病药物作用靶点等相关研究，熟悉云南省中医药治疗艾滋病血液样本库的建立与信息化管理，自血液样本库建立以来，各环节正常运行。

　　3知情同意

　　知情同意[2～3]是建立血液样本库过程中遇到的最重要的法律和伦理学问题，它是保证受试者或者血液捐赠者了解并理解试验或研究的目的和内容，自愿同意参加试验或研究、有权知道研究结果、并有权随时放弃参加研究的一种书面同意书。这也是对所有进行人体研究或人体取样调查的研究人员的伦理学要求。在以人为试验或研究对象的领域，研究人员必须获得知情同意，使受试者或者血液捐赠者的利益和权利得到保护，同时，这也是对研究人员的保护。

　　本项研究方案已通过相关医学伦理委员会的审查和批准，在知情同意书中分析了血样捐赠者的风险和不适，明确了权利、职责和隐私保护问题。

　　4质量控制

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