2.3 血液、尿液及组织标本制备 连续7 d给予造模及治疗药物后，大鼠放入代谢笼中禁食不禁水，收集24 h尿液，眼内眦取血，常温静止30 min，5 000 r·min^-1，4 ℃离心10 min，分离上清，待用;尿液处理：5 000 r·min^-1，4 ℃离心10 min，分离上清。并将大鼠处死，取肾脏，-70 ℃保存待用。

　　2.4 血清尿酸、肌酐及尿尿酸测定 采用尿酸测定试剂盒和肌酐测定试剂盒测定。

　　2.5 RT-PCR法测定肾脏相关转运体的表达 取100 mg左右肾组织，加入1 mL Trizol，冰浴研磨匀浆，将匀浆液移至离心管中，4 ℃，12 000×g离心5 min;将上清移至新离心管，室温静置5 min，使其充分裂解，加入0.2 mL氯仿，混匀至充分乳化，室温静置2～3 min;12 000×g 4 ℃离心15 min，将上层水相移至另一管中，加入等体积的异丙醇，充分混匀后-70 ℃过夜;再次4 ℃，12 000×g离心10 min，弃上清;加1 mL 75%乙醇漂洗1次，再4 ℃，8 000×g离心5 min，弃上清，放置待乙醇蒸发后加10～30 μL无RNA 酶水溶解，至-70 ℃冰箱保存待用。用紫外分光光度计测定260，280 nm吸光度比值，计算RNA纯度。按High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kits说明进行反转录成，合成cDNA。

　　引物根据NCBI公布的大鼠基因序列，设计上下游引物： mURAT1（5′-GCTACCAGAATCGGCACGCT-3′，5′-CACCGGGAAGTCCACAATCC-3′）;mGLUT9（5′-GAGATGCTCATTGTGGGACG-3′， 5′-GT GCTACTTCGTCCTCGGT-3′）;mOCT1（5′-ACATCCATGTTGCTCTTTCG-3′，5′-TTGCTCCATTATCCTTACCG-3′）;mOCT2（5′-ACAGGTTTGGGCGGAAGT-3′， 5′-CACCAGAAATAGAGCAGGAAG-3′）;mOCTN1（5′-TGTTCTTCGTAGGCGTTCT-3′， 5′-TGGAATAAACCACCACAGG-3′）;mOCTN2（5′-TCTACGAAGCCTCAGTTGC-3′， 5′-ATTCCTTTGACCCTTAGCAT-3′）;GAPDH（5′-GAGAAGATTTGGCACCACAC-3′，5′-CATCACAATGCCAGTGGTAC-3′）。根据Power SYBR GREEN PCR MASTER MIX试剂盒说明应用Applied Biosystems 7500 Real-time PCR System进行实验。将10 ng样品cDNA、5 μmol引物和10 μL Power SYBRGREEN PCR MASTER MIX溶于DEPC水，总体积为20 μL，置于PCR管中反应。反应条件为95 ℃预变性10 min，95 ℃变性15 s，60 ℃退火60 s，72 ℃延伸5 min，共40个循环。应用2^-ΔΔC_t方法计算各基因相对含量。

　　2.6 数据处理 应用SPSS 11.5统计软件分析，计量资料以±s表示，组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）。

　　3 结果

　　3.1 益母草提取物对高尿酸血症大鼠血清尿酸、肌酐及尿酸的影响 与正常组相比，模型组血清尿酸、肌酐水平显著上升（P<0.01），尿尿酸水平显著下降（P<0.05）。与模型组相比，别嘌醇组血清尿酸水平显著下降（P<0.01），肌酐水平有所下降，但无显著性差异，尿中尿酸水平也明显下降，论文答辩但无显著性差异;益母草提取物各剂量组血清尿酸水平显著下降（P<0.05，P<0.01），各剂量组血清肌酐水平显著下降（P<0.05），益母草中、低剂量组尿尿酸水平显著上升（P<0.05），见表1。

　　3.2 益母草提取物对高尿酸血症大鼠肾脏尿酸转运体的影响 与正常组相比，模型组肾脏URAT1，GLUT9 mRNA 的表达显著升高（P<0.05，P<0.01）;与模型组相比，别嘌醇组URAT1，GLUT9 mRNA表达下降，其中URAT1有显著性差异（P<0.05）;益母草提取物各组URAT1 mRNA的表达显著下降（P<0.05），GLUT9 mRNA的表达下降，其中益母草提取物高剂量组有显著性差异（P<0.05），见图1。

　　与正常组相比，模型组OCT1，OCT2 mRNA 表达显著下降（P<0.05，P<0.01）;与模型组相比，别嘌醇组OCT1，OCT2 mRNA 表达上升，其中OCT2 mRNA 表达有显著性差异（P<0.05）;益母草提取物各剂量组OCT1 mRNA表达均显著上升（P<0.05），OCT2 mRNA表达上升，其中高、低剂量组有显著性差异（P<0.01），见图2。

　　与正常组相比，模型组OCTN1，OCTN2 mRNA表达显著降低（P<0.01，P<0.001）;别嘌醇组OCTN1，OCTN2 mRNA 表达上升，其中OCTN2 mRNA 表达有显著性差异（P<0.05）;益母草提取物高、低剂量组OCTN1 mRNA表达显著上升（P<0.05），各剂量组 OCTN2 mRNA表达均显著上升（P<0.01，P<0.001），见图3。

　　4 讨论

　　高尿酸血症的主要表现为体内尿酸蓄积，主要成因包括2个方面：①尿酸生成或多，可能与摄入过多高嘌呤食物，或者与嘌呤代谢相关的酶发生异常有关;②尿酸排泄减少，肾脏是尿酸排泄的主要部位，如果肾脏功能发生异常，则会使尿酸无法排出体外，从而造成尿酸在体内的蓄积。同时，过多的尿酸盐在肾脏中发生结晶，也会进一步影响肾脏的排泄功能。

---

期刊库（http://www.zgqkk.com），是一个专门从事期刊推广、投稿辅导的网站。
　　本站提供如何投稿辅导，寻求投稿辅导合作，快速投稿辅导，投稿辅导格式指导等解决方案：省级投稿辅导/国家级投稿辅导/核心期刊投稿辅导//职称投稿辅导。

---

　　【免责声明】本文仅代表作者本人观点，与投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站无关。投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。