取槲皮素对照品、山柰素对照品和异鼠李素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每lmL含槲皮素12μg、山柰素2μg和异鼠李素15μg的混合溶液，摇匀，即得。
　　2.3供试品溶液的制备
　　取本品1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入80%甲醇40mL，称定质量，超声处理（200W，40kHz）30min，取出，放冷，再称定质量，用80%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
　　2.4方法学考察
　　2.4.1精密度试验取本品1.0g，精密称定，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下的色谱条件连续进样6次，记录各指纹图谱。以11号峰异鼠李素为参照峰，7个共有峰的相对保留时间与相对峰面积的RSD分别为0.020%～0.44%和0.20%～2.4%，说明仪器精密度良好。
　　2.4.2重复性试验取本品6份，每份1.0g，精密称定，按2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下的色谱条件进样，记录各指纹图谱。以11号峰异鼠李素为参照峰，7个共有峰的相对保留时间与相对峰面积的RSD分别为0.010%～0.23%和0.56%～1.9%，说明本实验重复性良好。
　　2.4.3稳定性试验取本品1.0g，精密称定，按2.3项下方法制备供试品溶液，室温下保存，按2.1项下的色谱条件分别在0，2，4，6，8，12h进样，记录各指纹图谱。以11号峰异鼠李素为参照峰，7个共有峰的相对保留时间与相对峰面积的RSD分别为0.060%～1.3%和0.25%～2.4%，说明样品在12h内稳定。
　　2.5样品测定
　　取不同批次的沙棘膏1.0g，按2.3项下方法制备供试品溶液，将混合对照品溶液和供试品溶液各进样10μL，记录色谱图，共获得7个共有峰，通过对照品指认，其中3个共有峰分别为槲皮素（5号峰）、山奈素（6号峰）、异鼠李素（7号峰），结果见图1。与异鼠李素参照物峰对应的峰为S峰，计算特征峰2～7的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%之内。规定值为0.75（峰2），0.84（峰3），0.85（峰4），0.87（峰5），0.99（峰6），1.00（峰7），见表2。
　　从表2可知，15批样品除特征峰1外，其余6个特征峰的相对保留时间均在规定值的±5%以内。故与异鼠李素参照物峰对应的峰为S峰，计算特征峰2～7的相对保留时间，其相对保留时间在规定值的±5%之内。
　　实验过程发现各批次沙棘膏样品指纹图谱（色谱峰个数及信号响应值）差异大，从23批样品中剔除了色谱峰明显缺失的5批样品，以及4批与其他批相似度较低的沙棘膏，最终纳入15批样品生成对照图谱，提取了7个特征峰;生成的对照图谱中，保留时间24～40min色谱峰分离度较差。
　　2.6沙棘膏指纹图谱建立与分析
　　2.6.1参照色谱峰的选择由于沙棘膏主要含黄酮类成分，且为其有效成分。经色谱峰的光谱分析及与对照品保留时间比较，图1所示指纹图谱最后一个峰（保留时间约57min）为异鼠李素，其分离度好、峰高最大，因此将其作为本实验的参照色谱峰。
　　2.6.2指纹图谱分析本实验共测定23批沙棘膏供试品的指纹图谱，4批沙棘膏（西藏沙棘膏）与其他批次相似度较低，均低于0.700，见表3;5批沙棘膏样品大部分色谱峰明显缺失，且各色谱峰响应较低，结合前期的检查项、薄层鉴别、含量测定等结果，判定其为不合格样品。故仅纳入15批沙棘膏样品生成对照指纹图谱，将其导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2.0版），生成对照指纹图谱，确定了7个特征峰，见图2，相似度计算结果见表3，4。从指纹图谱相似度结果可知，最低的相似度达到0.866，故建议沙棘膏指纹图谱相似度不低于0.850。
　　3讨论
　　3.1提取溶媒和方法的考察
　　考察了甲醇、乙醇和水提取样品后的特征图谱情况，发现甲醇提取样品的特征图谱色谱峰多、峰高较高，因此，初步选择甲醇作为提取溶剂。进一步考察了40%，60%，80%的甲醇溶液提取的样品的特征图谱，结果表明80%甲醇提取的供试液中色谱峰个数较多，且整体图形中各峰峰面积大小相对较均匀，故提取溶媒选择80%甲醇。对超声和回流2种不同提取方法进行比较，二者提取液中峰数及峰面积相差不大，超声方法较简便快捷，故选择超声提取方式。同时对提取时间（20，30，40，50min）、溶媒用量（20，30，40，50mL）进行考察，最终确定上述2.3项下供试品溶液的制备方法。
　　3.2色谱条件的考察
　　分别考察了乙腈-水，乙腈-0.4%磷酸溶液，甲醇-0.4%磷酸溶液流动相系统，结果表明，以甲醇-水为流动相时，图谱信息较少，30min后才出色谱峰。流动相中以0.4%的磷酸浓度最为适宜，若采用0.2%的磷酸，部分色谱峰分离度差。以乙腈-0.4%磷酸为流动相时，色谱峰信息较丰富，且各色谱峰分离度较好，因此选择乙腈（A）-0.4%磷酸（B）为流动相。经分析样品特征图谱3D数据、等吸收图，发现沙棘膏色谱峰的吸收主要集中在360nm及250nm左右。由于250nm的低波长处各类物质均有较大吸收，干扰大;沙棘膏主要有效成分为黄酮类成分，因此选择360nm进行特征图谱的测定。同时对流速（0.9，1.0，1.1mL·min-1），柱温（25，30，35，40℃）进行了考察，最终确定了2.1项下色谱方法。

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