摘要：目的 观察鹿茸对大鼠缺血下肢毛细血管密度（MVD）的影响。方法 SD大鼠108只，随机分为正常组，模型组，鹿茸高、中、低剂量组，复方丹参片组，每组18只。正常组仅作皮肤切开缝合，余组建立大鼠下肢缺血模型，术后第二天开始给药，分别于术后3d、7d、14d各组取大鼠6只，取大鼠内收肌组织免疫组化检测微血管密度（MVD）、HE病理染色，比较各组差异。结果 鹿茸高剂量组MVD在用药后7d、14d均高于模型组和低剂量组（P<20.05），组间存在统计学意义。结论 鹿茸可以促进大鼠下肢缺血模型的毛细血管密度增加，促进血管新生。
　　关键词：缺血；毛细血管密度；鹿茸
　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-1349（2014）01-0080-02
　　下肢缺血性疾病是因动脉狭窄或闭塞而引起下肢动脉的供氧量与组织静息状态下维持生存能力的氧气需求量之间不均衡所致的一类疾病，其发病率在中国逐年上升，目前缺乏有效的治疗方法。近年来，促血管新生技术的出现，使得在缺血部位重建有效的侧支循环逐渐成为可能，为缺血性疾病提供了新的治疗策略。祖国医学认为，脉形成的物质基础是肾精，脉的形成源于先天之精，脉的营养有赖于后天之精补充，与脾肾的功能密切相关。鹿茸温补肾阳，补益精血，强筋骨。本实验研究制备了大鼠下肢缺血模型，观察鹿茸对缺血下肢毛细血管密度的影响。
　　1 材料与方法
　　1.1动物分组 108只SD大鼠，体重250g～300g，随机分组，正常对照组18只，模型组18只，鹿茸组高剂量18只，中剂量18只，低剂量18只，复方丹参片组18只。
　　1.2动物模型 10%水合氯醛（0.35ml/100g）行大鼠腹腔注射麻醉，选左侧腹股沟中点向膝部作一长度约1.5cm的纵行切口，紧贴腹股沟下方分离股动脉主干，鹿茸组、丹参片和模型组行左下肢股动脉结扎及分支剔除术，造成下肢血管缺血模型，对照组仅暴露股三角，不结扎股动脉及其分支。术后前3d给予抗生素（青霉素8万单位，肌肉注射）。
　　1.3给药方法 鹿茸取自山西省中医院中药房，用普通粉碎机初粉后再用超微粉碎机制成极细粉。温开水调，搅拌匀。灌胃备用。鹿茸高剂量组0.572g/kg；鹿茸中剂量组0.286g/kg；鹿茸低剂量组0.143g/kg（1mL/100g）。复方丹参片（广州白云山和记黄埔中药有限公司，批号：F2A018），研碎后温开水调匀（0.288g/kg，1mL/100g）。模型组和对照组灌服蒸馏水。1mL/100g，每天一次，连续14d。
　　1.4检测指标 术后3d、7d、14d后，各组取大鼠6只，取术侧内收肌群组织，免疫组化法观测缺血下肢毛细血管密度。病理染色，取术侧内收肌群一小块肌肉组织，HE染色，观察骨骼肌细胞间血管数目。
　　1.5免疫组化染色
　　1.5.1实验试剂 一抗：CD34北京博奥森，货号：bs-2038R。二抗兔二抗北京中杉金桥，货号：sp-9001。显色剂：DAB；北京中杉产品，货号：ZLI-9032。
　　1.5.2标本制作 取小于0.5cm×0.5cm×0.1cm组织块，PBS洗，用4%多聚甲醛固定，经石蜡包埋后4μm的组织连续切片，附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，60℃过夜；脱蜡、入水后，抗原修复：柠檬酸缓冲液，热修复20min，PBS洗3次，5min；再按照美国ZYMED公司SP系列试剂盒即过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒说明书进行标本染色，然后进行400倍的显微照相。
　　1.6统计学处理 计量资料以均数±标准差（x±s）表示，应用方差分析（Anova）、LSD多重比较。采用SPSS13.0统计软件处理。
　　2 结果
　　2.1伤口愈合情况 术后3d伤口结痂未见明显出血，7d后伤口渐愈合，14d后痂脱落，未见坏死，部分大鼠缺血下肢足垫处可见黑色瘀斑，术后7d模型组2例，低剂量组1例，术后14d，模型组两例，低剂量组2例。
　　2.2毛细血管密度（MVD）测定结果 术后3d，各组间MVD值无统计学意义，术后7d，高剂量组显著高于模型组和低剂量组（P<0.05），术后14d高剂量组MVD值显著高于模型组和低剂量组（P<0.05），各组在不同时点值变化无统计学意义。详见表1。
　　2.3病理组织 空白组大鼠肌细胞排列整齐，肌纤维间有一定量血管分布，模型组大鼠肌细胞萎缩，间质增生，血管数目较空白组增多，鹿茸高剂量组大鼠肌细胞萎缩较轻，肌纤维间血管分布数目较模型组多，中低剂量组肌纤维间血管数目增多，但不及高剂量组，丹参片组血管分布轻度增多。
　　3 讨论
　　祖国医学认为，脉形成的物质基础是肾精，脉的形成源于先天之精，脉的营养有赖于后天之精补充，与脾肾的功能密切相关。下肢缺血性疾病发生随年龄的增长而明显增加，老年人随着增龄，脏腑之气渐衰，脾肾虚损，脾胃不足，不能化生水谷精微，肾精不能得以补充，致阳明脉衰，脉道失养，微血管稀疏。中医认为本类病是由于肾阳不足、脾气不健又加外受风寒、寒湿之邪入侵、饮食不节而气滞血瘀、痰浊停阻脉络，气血不通，阳气不达，肢体失养所致，本病以脾肾亏虚为主，寒湿外伤为标，气血凝滞，经络阻塞为主要病机。多数医家多遵循标本兼治，即补肾健脾，益气活血，温阳通脉，鹿茸温补肾阳，补益精血，强筋骨，可恢复阳气温煦推动之力，使精血充盛，促进病变部位血管生成，改善下肢缺血。MVD值是评价血管生成的指标，MVD值越高说明新生毛细血管越丰富，血管新生须经历一系列复杂过程。本研究结果显示，术后3d MVD值变化差异不显著，但术后7d、14d中高剂量组MVD均明显高于对照组，鹿茸可以促进新生血管的形成。早期用药能更早的促进血管新生，预防病变发展和及早减轻患者不适症状，防治缺血造成的肢体损害。
　　复方丹参片具有活血化瘀，理气止痛的特点。刘小雨等研究促血管新生药物中丹参通利关脉，生肌长肉，促进创伤修复再生，改善局部微循环，减轻组织缺血再灌注损伤，促进血管新生。本实验选择以丹参为主要成分的复方丹参片做阳性对照。
　　本结果显示鹿茸能够促进大鼠缺血下肢血管新生，减轻大鼠患肢缺血状态，高剂量组效果优于低剂量组，且在缺血早期血管新生不明显，缺血一周后，给予鹿茸高剂量的大鼠毛细血管密度开始明显高于模型组和低剂量组。
　　本研究初步得出鹿茸能够促进缺血下肢的血管新生，那么促进下肢血管新生的机制是什么，鹿茸是否具有把EPCs动员到外周缺血组织的作用？是否需要活血药来促进它的表达，这些还有待进一步的实验及临床观察。

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