图1 不同处理的Jurkat细胞western blot分析
　　图2 单细胞凝胶电泳后DNA经Green-DNA dye染色（X200）
　　注：A为空白对照组，B为H2O2处理组，C为EBSS作用后的H2O2处理组
　　图3 Jurkat单细胞凝胶电泳后DNA尾距统计分析
　　注：A为空白对照组，B为H2O2处理组，C为EBSS作用后的H2O22处理组
　　3讨论
　　细胞自噬是继细胞凋亡后发现的新的细胞死亡方式，目前为止，已经发现了34个自噬相关基因Atg（autophagy related gene），参与多种自噬信号通路，LC3分子是其中之一。LC3前体（ProLC3）首先加工成胞浆可溶性形式LC3-Ⅰ，降解成形成LC3-Ⅱ，LC3-Ⅱ定位于前自噬体和自噬体，是自噬的标志分子，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的大小在一定程度上可评估自噬水平的高低[7]。我们的研究表明，饥饿应激下的Jurkat细胞表现出自噬特征（图1），由于自噬是细胞自身正常现象，只是应激状态下更为强烈，因此阴性对照里，同样看到一定量的LC3-Ⅱ，只是相对阳性组少些，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值处理组大于阴性组。相关的研究认为，细胞自噬是细胞在营养缺乏或应激条件下，清除胞质内错误折叠的蛋白质、脂类、入侵的病原体以及受损的细胞器、回收代谢物质、降低活性氧（reactive oxygen species，ROS）的伤害、修复DNA损伤的一种自救和质控方式；在物质回收的过程中，异常的蛋白质和受损的细胞器残片在自噬小体（autophago-some）中得以消化，消化后得到的氨基酸和葡萄糖等可被细胞再利用，因此，细胞自噬的重要生理功能在于促进处于逆境的细胞的存活，即本质上细胞自噬是一种促生存反应，尽管过度的自噬也可能导致细胞死亡，化疗和放疗可以杀死体内大部分的癌细胞，但一部分癌细胞可通过自噬方式，回收物质、保存能量，从逆境中生存下来，逃避凋亡的命运，体外实验显示，药物诱导的细胞自噬，往往伴随着细胞周期的停滞和DNA的修复[5]。
　　H2O2是一种结构简单的化学物质，被广泛应用于消毒，其蕴含在中风和缺血治疗中的丰富生物意义尚在研究之中，已有报道H2O2处理细胞可以导致DNA损伤[8]。自噬是一种正常的生命现象，在自噬存在的条件下，H2O2的作用效果值得研究。我们在饥饿诱导Jurkat自噬的条件下，用H2O2继续处理细胞，发现H2O2对Jurkat细胞的DNA损伤增强（图2、3），具有统计学差异（P<0.05）。已有的研究报道，DNA损伤是细胞自噬的原因之一，当DNA损伤时，会引起核p53移位，激活细胞周期监测点，细胞周期停止而自噬发生[3]。饥饿诱导自噬导致了活性氧的产生，从而导致DNA损伤[9]，这与我们的结果相一致，这在一定程度上也拓展了H2O2的作用效果，在H2O2使用过程中具有一定的指导意义。或者从另一方面看，H2O2可能阻止了药物诱导的细胞自噬伴随的DNA修复，尚需进一步的研究。
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　　[9]Rodríguez-Vargas JM，Ruiz-Maga？a J，Ruiz-Ruiz C，et al.ROS-induced DNA damage and PARP-1 are required for optimal induction of starvation-induced autophagy[J].Cell Research，2012，22（7）：1181-1198.编辑/申磊

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