【摘要】本文通过探讨大鼠急性心肌梗死(AMI)后骨髓单核细胞（BMMNCs）移植对心功能和梗死局部血管新生的影响及其可能机制得出结论：大鼠AMI1w后BMMNCs移植可以增加梗死局部血管新生，进而改善心梗后心功能，其心功能改善及血管新生与BMMNCs的横向转化无关。
【关键词】骨髓单核细胞 细胞移植 心肌梗死 血管新生
本试验探讨了骨髓单核细胞(BMMNCs)移植对急性心肌梗死(AMI)后心功能的影响及其机制，旨在为老年AMI患者BMMNCs移植的临床应用提供实验依据。现报告如下：
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 成年近交系Wistar雄性大鼠36只，体重170g～200g。随机分为对照组10只，AMI 1h移植组10只，AMI 1w移植组10只，剩余6只作为BMMNCs供体。
1.2 动物模型建立 3%戊巴比妥钠，腹腔麻醉，气管插管，呼吸机正压辅助呼吸，采取胸骨正中切口开胸，暴露心脏，剪开心包，在肺动脉圆锥与左心耳交界稍下1～2 mm处用4-0 无损伤线结扎左冠脉前降支,造成左室前壁MI。
1.3 BMMNCs的制备与标记 移植前2h，取3只大鼠，断颈处死。无菌条件下取两后肢长骨，离心获取骨髓细胞，密度梯度离心法获取BMMNCs并制成细胞悬液，DAPI （sigma）染色40min，离心去除残留DAPI，无血清L-DMEM重悬细胞、计数，调整细胞密度为1×108/ml，转入1ml EP管中，置于冰上保存(不超过1h)直至移植。
1.4 心梗后BMMNCs移植 动物模型建立后，观察1h，直视下用微量注射器将已经过DAPI标记的BMMNCs（2×107个）（AMI 1h移植组）或NS（对照组）各0.2ml，多点注射至心肌梗死区中央和边缘处心肌层，AMI 1w移植组，则在AMI1w后再次开胸，相同部位多点注射BMMNCs（2×107个，0.2ml），术后常规预防感染。
1.5 心功能检查 分别于AMI前、AMI后8w超声心动图测量实验鼠的下列指标: 乳头肌水平短轴观行M型取样测量左室舒张末内径(LVEDd)，收缩末内径(LVEDs)，左室射血分数（LVEF），左室短轴缩短率（LVFS）。所有数值均测量三个连续心动周期，然后取其平均值。
1.6 组织学检查 AMI后8w处死动物，取移植区及周围组织，10%中性甲醛固定、石蜡包埋、连续切片，片厚4µm。
1.6.1 移植细胞检测 每块石蜡块间隔切片10张，紫外线作为激发光源，荧光显微镜下观察DAPI标记的细胞。
1.6.2 局部毛细血管密度测定 切片进行HE染色，普通光学显微镜下观察心肌梗死区域，10×40倍视野下随机计数5个视野的毛细血管数目，取其平均数作为这一切片心梗区域的毛细血管数目，按照同样方法计数同一心脏标本的所有其他组织切片（共15张）的毛细血管数目，再次取平均数，作为这个心脏标本心梗区域的毛细血管数目。
1.7 统计学处理 所有数据采用x-±s表示,组间两两采用t检验进行比较，检验水平为α=0.05。
2 结果
2.1 动物生存情况 对照组死亡2只，AMI 1h移植组死亡2只，AMI 1w移植组死亡3只。其余动物均成活良好，直至8w后处死。
2.2 BMMNCs移植前后心功能 AMI前M超声检查结果显示，对照组、AMI 1h移植组及AMI 1w移植组各项指标均无差别（未显示数据）；术后8w，AMI 1h 移植组与对照组比较，各项超声指标无差异；AMI 1w移植组LVEDd明显低于AMI 1h移植组，而与对照组相比，无显著差异，其LVEDs则显著低于其他两组，相应其LVFS及LVEF显著高于对照组和AMI 1h 移植组。
2.3 移植细胞检测结果 AMI 8w后，在紫外线激发下，正常心肌区域、对照组梗死区域、MI 1h移植组梗死区域及MI 1w移植组梗死周边区域均可见自发荧光，在所有移植过BMMNCs的心脏标本切片中均未发现DAPI标记的细胞。
2.4 局部毛细血管密度测定 对照组和AMI 1h移植组之间无统计学差异(P＞0.05)。AMI 1w移植组心肌梗死区域毛细血管数目较其他两组则明显增多(均P＜0.01)。
3 讨论
骨髓单核细胞移植可以改善大鼠急性心肌梗死后心功能，其改善心功能的机制可能与促进梗死局部血管新生有关；干细胞移植时，应注意移植时机，本实验提示急性心梗后1周进行细胞移植优于心梗后1小时干细胞移植。期待以后更大样本及更为深刻的研究。
参 考 文 献
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[2]张少衡,葛均波,孙爱军等.纯化人源骨髓单克隆间充质细胞移植更利于梗死心脏功能恢复[J].中国介入心脏病学杂志,2005,13(3):149-53.
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