作者：聂传平 曹洪昭 郭伟英
【摘要】 采用正交设计优化布洛芬传递体处方，制得的布洛芬传递体粒径分布为(122.3±31.9) nm，并以水?甲醇(20∶80，0.1%三氟乙酸)为流动相，HPLC测其平均包封率为48.92%。初步稳定性考察表明，在低温(4℃)贮存7 d，制品平均粒径及分布变化小，药物泄漏少于3%，性质较稳定，为布洛芬新的给药技术提供了依据。
【关键词】 布洛芬; 传递体; 包封率; 稳定性; 渗漏率
传递体(transfersomes，TF)是一种类脂聚集体，主要成分为磷脂和表面活性剂(如胆酸钠、去氧胆酸钠等)[1]。粒径为数十至数百纳米，外观为胶体溶液，亦称为柔性纳米脂质体(flexible nano?liposomes，FNL)[2]。TF是由脂质体处方改进而来，嵌入泡囊膜中的表面活性剂使其具有高度变形性，且能高效穿透比它本身小数倍的孔道，因此可用作各种大分子、水溶性或脂溶性药物载体。布洛芬(1)生物半衰期短，维持治疗浓度需频繁用药，可能增加胃肠道的不良反应[3]及对肝、肾的损害作用[4]。为减轻1的不良反应，近几年国内外研制了多种新制剂和制剂新技术，如口腔崩解片、眼用纳米混悬制剂、经皮给药微凝胶剂和脂质纳米囊载体。本试验结合1的理化特性，利用新型TF技术包封1，以期减轻1的不良反应。
1 仪器与试药
FL 2200型液相色谱仪(杭州福立分析仪器有限公司);Nicomp380 ZLS型激光散射粒度仪(美国PSS公司);JY96?Ⅲ型超声波细胞粉碎机(上海新芝生物研究所)。
1原药(山东新华制药厂，含量≥99.7%，批号071002);1对照品(中国药品生物制品检定所，含量≥99.9%，批号100179?200303);大豆磷脂(上海金伴药业有限公司，批号20080904);去氧胆酸钠(上海化学制剂供应站);葡聚糖凝胶G?50(上海化学试剂厂);维生素E(VE，天津市光复精密化工研究所)。
2 方法与结果
2.1 1?TF的制备[5]
尝试了薄膜分散法、乙醇注入法、乙醚注入法、反相蒸发法等制备方法，由于后3种方法难以得到脂质膜，故选用薄膜分散法。精密称取1 10 mg、大豆卵磷脂30 mg、去氧胆酸钠3.75 mg、VE 0.37 mg置磨口茄型瓶中，加入氯仿-甲醇(1∶1，v/v)8 ml，于35 ℃、30 r/min减压旋蒸除去有机溶剂，在茄形瓶内壁形成一层均匀的透明脂质薄膜，加重蒸水10 ml，于45℃、60 r/min继续旋蒸水化1 h，将所得的水化混悬液在冰浴条件下经超声波细胞粉碎机处理2次(100W)，每次2.5 min，间隔30 s，再依次经0.8、0.45、0.22 μm微孔滤膜过滤，得半透明、具有淡蓝色乳光的1?TF水分散体(1 mg/ml)。
2.2 1?TF形态及粒径考察
配制3%磷钨酸钠溶液，临用前调节pH值7.0，滴加到蜡板上，另将稀释至一定浓度的1?TF样品滴到铜网正面，用滤纸吸去过多样品液，将铜网正面向下盖到染液滴上，负染色10min，取出铜网，用滤纸吸去过多染液，将铜网正面向下置于玻璃皿中，晾干，在透射电镜下观测其形态[6]。从电镜视野可见，1?TF形态均为球形或近球形，粒径在120±20nm，颗粒分布均匀。
图1 1?TF透射电镜照片
采用动态光散射法测得1?TF的粒径分布均较窄，符合Gaussian分布，卡方值小于3，平均粒径122.3 nm，见图2。
2.3 1?TF包封率测定
2.3.1 分析方法的建立[7] 色谱条件：色谱柱Venusil XBP?C18柱(4.6 mm ×200 mm，5 μm)，流动相 水?甲醇(20∶80，含0.1%三氟乙酸);检测波长263 nm，流速1 ml/min，柱温24 ℃，进样量20 μl。
线性关系：精密称取1对照品25 mg，置50 ml量瓶中，加流动相溶解并定容。分别精密量取1标准溶液1、2、3、4、5、6 ml，置10 ml量瓶中，用流动相定容，得1浓度为0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mg/ml的系列溶液。分别进样测定，记录峰面积(A)，以1浓度(c)对A线性回归，得标准曲线方程A=1.39×103c?9.42×104，R2=0.999 8。结果表明1浓度在0.05～0.3 mg/ml范围内与峰面积有良好的线性关系。取0.05、0.15、0.25 mg/ml 3种不同浓度1对照液，重复进样5次，连续测定5天，日内、日间RSD(%)分别为1.03、0.95、0.86和1.26、0.66、0.96，平均回收率为99.89%，RSD 0.75%。
图2 1?TF粒径分布
2.3.2 1?TF包封率测定[8] 取同批1?TF，共2份，每份2 ml。一份置10 ml量瓶中，以10% TritonX?100溶液3 ml破乳，以流动相定容;另一份上葡聚糖凝胶G?50柱，用pH 7.4磷酸盐缓冲液(PBS)洗脱，分离1?TF与游离药物，将分离得到的1?TF置10 ml量瓶中，以10% TritonX?100溶液3 ml破乳，以流动相定容。将上述两份样品分别进样测定1的含量，第一份测得值为W总，第二份为W包，按下式计算包封率：包封率(%)=W包/W总×100。测得按最佳处方制备的3批1?TF样品平均包封率为48.9%，RSD 0.61%(n =3)。
2.4 1?TF初步稳定性考察
2.4.1 1?TF粒径分布变化 将1?TF分别置4、25和37 ℃保存，于0、1、2、3、4、5、6和7 d取样，以水稀释使大豆卵磷脂浓度为2 mmol/L，采用动态光散射法测定1?TF样品的粒径分布，见表1。结果表明，1?TF于4 ℃贮存7 d，平均粒径由122.3 nm略增至125.1 nm;粒径分布变化很小，变异系数(CV)由新鲜制备的0.261增至0.334。25和37 ℃条件贮存7 d，1?TF平均粒径分别为134.8 nm和138.2 nm，比4 ℃保存显著增大(P<0.05);1?TF粒径分布也变宽，CV分别增至0.303和0.360。表1 放置不同时间1?TF的粒径分布变化*注：* 新鲜制备的1?TF粒径为(122.3±31.9) nm，CV为0.261。
2.4.2 药物泄漏试验 药物泄漏试验采用透析法[9]。将1?TF透析介质(0.01 mol/L生理等渗PBS pH7.4)稀释至1浓度为0.5 mg/ml，取0.5 ml加至透析袋中，置装有40 ml透析介质的具塞三角烧瓶中，于4和25℃贮存7d，平行试验3份。分别于0.5、1、1.5、2、3、4、5、6和7d取样，HPLC法测定1含量，计算累积泄漏百分率，结果见图3。4 ℃保存时，1?TF泄漏率很低，2 d内的累积泄漏百分率小于2.5%，7 d内的累积泄漏百分率小于3%;25 ℃保存时，1?TF的泄漏率显著高于4 ℃，7 d超过12%。因此，1?TF宜在低温(4 ℃)保存。
系列1：1?TF(4 ℃);系列2：1?TF(25 ℃)
图3 1?TF累积渗透漏曲线(n=3)
3 讨论
采用反相蒸发法制备1?TF时，曾选用二氯甲烷和乙醚两种溶剂，但实验结果显示，该方法的重复性较差，其中后者更差，这可能与药物自身的性质有关。曾用乙醚注入法制备1?TF，但因乙醚的沸点只有34.5 ℃，药物、磷脂及去氧胆酸钠在溶解时就会挥发一部分乙醚，同时在除去乙醚时，形成的1?TF易结块，实际操作中，难以控制。最终选用经典的薄膜分散法制备1?TF，所成膜均一。
1是弱酸性药物(pKa 4.4)，在酸性条件下溶解度较低，主要以分子形式存在，较易透过角质层。因此为提高1的最低检测量，本试验用0.1%三氟乙酸将流动相调至pH2.0。
通常在pH 7.4缓冲液和4℃保存条件下，包载药物的传递体在短期内能保持较好的稳定性，之后内容物开始加快向外泄漏，这可能是传递体膜中的磷脂水解成溶血磷脂和游离脂肪酸，进而引起传递体膜的不稳定造成的。
【参考文献】
1 陈彤, 侯世祥, 石碧琼, 等. 传递体透皮研究的最新进展. 中南药学, 2005, 3(1): 43～46.
2 Cevc G, Schatzlein A, Blume G. Transdermal drug carriers: Basic properties, optimization and transfer efficiency in the case of epicutaneously applied peptides. J Controlled Release, 1995, 36(1?2): 3～16.
3 仲珑瑾, 程能能. 非甾体抗炎药致胃肠道损害机制的研究进展. 中国临床药学杂志, 2004, 13(1): 56～59.
4 Henry D, McGettigan P. Epidemiology overview of gastrointestinal and renal toxicity of NSAIDs. Int J Clin Pract, 2003, 135(suppl): S43～S49.
5 陆彬. 药物新剂型与新技术. 北京: 人民卫生出版社, 1998，121～133.
6 赵春晖, 王东凯, 李 翔, 等. 3种方法制备硫酸卷曲霉素脂质体及其药剂学性质考察. 中国药房, 2008, 19(31): 2442～2444.
7 罗晓清, 顾瑶华, 吴芝园. 八种中药挥发油对布洛芬促透作用的比较. 中药材, 2007, 30(5): 571～573.
8 高晓黎, 季兴梅. 葡聚糖凝胶柱色谱法测定脂质体包封率的条件筛选. Chin Pharm J, 2003, 38(7): 516.
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