【摘 要】 目的：建立十珍益母汤的的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对处方中当归、川芎进行定性鉴别;对当归中阿魏酸采用高效液相色谱法进行含量测定。 结果：供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱的相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰;阿魏酸在0.0198～0.496μg与峰面积线性关系良好，r=0.9996，平均回收率为99. 6 %，RSD为1.86%。结论：所用方法有良好的重复性及稳定性，操作简便，能有效地控制该制剂的质量。
【关键词】 十珍益母汤; 质量标准; 薄层色谱 ; 高效液相色谱
十珍益母汤是由当归、川芎、熟地黄、益母草、桃仁、赤芍、蒲黄、炮姜、王不留行、甘草等十味中药组成的口服制剂，功能主治为补血养血，活血化瘀，温经止痛，通经下乳。适用于产后血虚，头晕无力，恶露不尽，小腹疼痛，乳汁不足及因瘀血不净而致出血淋漓不止。方中当归补血养血、川芎活血化瘀，二者同为君药。十珍益母汤是我院著名中医的经验良方，用于临床取得很好的疗效，为有效控制该制剂质量，采用薄层色谱法对方中当归、川芎进行定性鉴别;采用高效液相色谱法对当归中阿魏酸进行含量测定。完善了该制剂的质量控制标准。
1 材料
岛津LC?1ADVP高效液相色谱仪，手动点样器(瑞士)，紫外分析仪ZF?C(上海康禾光电仪器有限公司);当归对照药材(北京中医药大学，批号101512?0901)，芍药苷对照品(中国生物制品检定所，批号121304?200812)。本实验所用药材均由河南大学药学院许文渊教授鉴定;十珍益母汤制剂成品3批(本院制剂室配制，批号090413，090507，090618);所用化学试剂均为分析纯或色谱纯。
2 薄层鉴别
2.1 当归
分别取3批十珍益母汤样品各20mL，各加乙醇60mL，摇匀，滤过，滤液挥至无醇味，加乙酸乙酯振摇提取两次，每次15 mL，合并乙酸乙酯提取层，在水浴上浓缩至约2mL，作供试品溶液1～3号。另取当 归对照药材2g，加水60 mL微沸煎煮0.5h，放冷滤过，滤液加水稀释至20mL，按上述方法制成2 mL当归对照品溶液。按处方比例及工艺，制备缺少当归的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成2 mL阴性对照溶液。照薄层色谱法[1](中国药典2005年版一部VIB)试验，吸取上述溶液各5uL，分别点于同一以0.6%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷?乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开后，取出晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(图1)。1～3：供试品; 4：阴性对照; 5：对照药材图1 当归薄层色谱图
2.2 川芎
分别取3批十珍益母汤样品各20mL，各加乙醇60mL，振摇5min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作供试品溶液1～3号。 另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例及工艺，制备缺少川芎的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制成2 mL阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部VIB)试验，吸取上述溶液各4 uL，分别点于同一硅胶G薄层板上。以三氯甲烷?乙酸乙酯?甲醇?甲酸(40︰5︰10︰0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点，阴性无干扰(图2)。1～3:供试品; 4:对照品; 5:阴性对照图2 川芎薄层色谱图
3 含量测定
3.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Kromasil C18(4.6mm×250mm，5 um);流动相：甲醇?水?冰醋酸(30﹕68﹕2);SPD?10AVP紫外检测器;检测波长：320 nm;进样量：20μL;流速：1.0 m L·min-1 柱温：30℃;理论塔板数按阿魏酸峰计算大于4000，分离度R大于1.5。
3.2 溶液的制备
3.2.1 对照品溶液 取阿魏酸对照品适量，精密称取6.2 mg，置于25 mL棕色量瓶中，加甲醇溶液并定溶至刻度，摇匀，制得初始液;精密量取初始液1 mL置50 mL棕色量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
3.2.2 供试品溶液 精密量取本品约3mL，置具塞锥形瓶中，加入甲醇50mL，超声处理(功率250W，频率20kHz)5min，放冷，再称定，用甲醇补足减失的的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
3.2.3 阴性对照溶液 按处方比例及工艺，制备缺少当归的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备不含阿魏酸的阴性对照溶液。
3.3 线性关系考察
分别精密量取初始液0.2、0.4、1、2、5mL，置50mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别精密量取20μL，注入色谱仪，记录色谱图，以吸收峰面积为纵坐标，阿魏酸进样量为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程：Y=117080.4X+6652.612，r=0.9996。结果表明阿魏酸在0.0198～0.496μg范围内线性关系良好。
3.4 精密度试验
取“3.2.1”项下对照品溶液20μL，在上述色谱条件下连续进样5次，记录色谱图，RSD为1.26%，结果表明精密度良好。
3.5 稳定性试验
精密量取对照品溶液在0，1，2，3，4，5h，连续进样6次，进样量为20μL，测得峰面积值，RSD为1.20%(n=6)，结果表明阿魏酸在5h内稳定。
3.6 重复性试验
精密吸取同一批(090413)样品3mL，5份，分别照供试品制备方法，制备供试品溶液，在上述色谱条件下，测定含量，RSD为1.65%，结果表明重复性良好。
3.7 干扰试验
分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL，按上述色谱条件分别进行测定峰，阿魏酸与其他组分能达到基线分层，阴性对照无干扰，见图3。A：供试品溶液;B：对照品溶液;C：阴性样品溶液图3 高效液相色谱图
3.8 加样回收率试验
精密吸取已知阿魏酸含量的同一批(090413)样品5份，分别加入阿魏酸对照品初始液2mL，按供试品制备方法，制得供试品溶液，照上述条件进行检测，结果见表1。
3.9 样品含量测定
精密吸取样品溶液20μL，按上述色谱条件测定3批制剂中阿魏酸含量，结果3批含量分别为0.19%,0.21%,0.21%。表1 加样回收率试验结果
4 讨论
本实验在阿魏酸的含量测定中，先采用药典当归项下的流动相实验，结果被测峰与杂质峰分离不开，后改为本研究所用流动相，结果显示分离完全。同时对检测波长也进行了考察，结合紫外吸收光谱图，选择320 nm作为检测波长。
选择薄层色谱对中药口服制剂中的当归、川芎进行定性鉴别，方法及试验条件的选定根据当归、川芎所含主要成分的性质而定[2]。当归的主要成分为阿魏酸，先用乙醇溶解，再用乙酸乙酯提取药材中的专属性成分，解决了其它成分的干扰问题。川芎的主要成分为芍药苷，实验中用乙醇作为提取溶解溶液，结果表明效果好，方法简便。因其它药材成分对当归、川芎的屏蔽作用，采用薄层层析法，作为鉴别方法，专属性较强，灵敏度高，重现性好。选用高效液相法测定阿魏酸的含量，方法简便、准确，重复性好，提高了制剂质量的可控性。
【参考文献】
1 中国药典.一部. 2005，118～119.
2 张钦德.中药制剂分析技术实验指导.北京：中国中医药出版社，2006，14.
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