1.3 样液制备

　　将在秦巴山区采摘的竹叶清洗干净，放于干燥箱干燥，等完全干燥后取出进行粉碎，用100目标准检验筛筛选，取其样品干燥粉末。

　　准确称取样品干燥粉末1.0000g（±0.0020）若干份，加入一定浓度的乙醇提取剂若干毫升，调整提取液一定pH值，在室温下提取浸泡一定时间后抽滤，转移滤液于100mL容量瓶中，用一定浓度提取剂稀释、定容至刻度线，准确量取上清液1mL于50mL容量瓶中，分别加入配好的质量分数5%的亚硝酸钠溶液1mL，摇匀放置6min，加质量分数10%的硝酸铝溶液1mL，摇匀放置6min，加质量分数5%的氢氧化钠溶液10mL，最后用一定浓度的乙醇若干毫升定容至刻度线，摇匀放置15min。以试剂空白为参比溶液，用1cm的玻璃比色皿在500nm处测量其吸光度3次，取平均值代入线性回归方程计算出总黄酮含量，并计算总黄酮提取率。

　　1.4 样液中总黄酮含量提取率的测定

　　式中：A-样液吸光度；V-样液体积；M-样品称取质量。

　　2 结果与讨论

　　2.1 单因素试验

　　2.1.1 提取剂乙醇用量对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

　　用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g（±0.0020）6份置于锥形瓶中，分别加入60%的乙醇10mL、15mL、20mL、25mL、30mL、40mL，调整pH值为7.0，在室温下浸泡提取30min抽滤，转移滤液至100mL容量瓶中，用60%的乙醇定容至刻度线，用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中，按照1.3中方法测定其吸光度，得到提取剂用量对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势（见图2）。

　　由图2可知，提取剂乙醇用量在<30mL时对竹叶中黄酮类化合物提取率影响较大，当乙醇用量达到30mL时黄酮类化合物提取率达到最大值8.441%，在30mL之后影响逐渐减弱，在40mL时黄酮类化合物提取率反而下降，这可能是由于溶剂中有效成分浓度高，临界层浓度差小，原料的有效成分不利于扩散引起的。因此，对竹叶中总黄酮类化合物提取中提取剂用量控制在20～40mL为好。

　　2.1.2 提取剂浓度对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

　　用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g（±0.0020）5份置于锥形瓶中，分别加入30mL浓度为40%、50%、60%、70%、80%的乙醇，调整pH值为7.0，在室温下浸泡提取30min抽滤，转移滤液至100mL容量瓶中，分别用对应浓度的乙醇定容至刻度线，用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中，按照1.3中方法测定其吸光度，得到提取剂浓度对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势（见图3）。

　　由图3可知，竹叶中黄酮类化合物提取率随着提取剂浓度的增加而增加，在70%后影响逐渐变小，在浓度为80%的时候达到最大值8.208%。因此，从经济方面考虑，对竹叶中总黄酮类化合物提取中提取剂浓度最好控制在60%～80%。

　　2.1.3 提取浸泡时间对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

　　用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g（±0.0020）5份置于锥形瓶中，加入60%的乙醇30mL并调整提取液pH值为7.0，在室温下分别浸泡提取10min、20min、30min、40min、50min抽滤，转移滤液至100mL容量瓶，用60%的乙醇定容至刻度线，用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中，按照1.3中方法测定其吸光度，得到提取剂提取浸泡时间对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势（见图4）。

　　由图4可知，在一定时间内随着提取浸泡的时间的增加，竹叶中黄酮类化合物的提取率明显增加，但是随着时间的延长，提取率会有所下降。其中提取浸泡时间为40min时候达到最高值7.069%，在50min时提取率下降，这是提取剂中乙醇挥发，导致提取剂中有效成分减少的原因。所以，对竹叶中总黄酮类化合物提取的提取剂浸泡时间控制在30～50min为佳。

　　2.1.4 提取液pH值对竹叶中总黄酮类化合物提取率的影响

　　用分析天平准确称取竹叶样品粉末1.0000g（±0.0020）6份置于锥形瓶中，加入60%的乙醇30mL，分别调整提取液pH值为5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0在室温下分别浸泡提取30min抽滤，转移滤液至100mL容量瓶，用60%的乙醇定容至刻度线，用移液管准确移取样液1mL于50mL容量瓶中，按照1.3中方法测定其吸光度，得到提取剂提取液pH值对竹叶中总黄酮提取率的影响趋势（见图5）。

　　由图5可知，提取液pH值在一定程度上影响竹叶中总黄酮类化合物的提取，但影响力度不大。实验中黄酮类化合物最高、最低提取率极差仅为1.010%，所以调整提取液pH值为7.5即可。

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