软腐菌识别侵染魔芋根部影响因子的研究(2)
1.2.3 不同pH条件下软腐菌在魔芋根表吸附量和根部侵入量测定 用1 mol/L HCl和1 mol/L NaOH将无菌水pH调节为5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,分别配制成浓度为6×107个/mL的细菌悬浮液,然后取50 mL相应值的细菌悬浮液放入250 mL培养瓶中,将魔芋苗放入其中,根部完全浸没到悬浮液中,每组处理3棵魔芋苗,置于30 ℃的光照培养箱内,在浸根接种后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h分别剪取幼根,测定不同pH条件下软腐菌根表吸附量和根部侵入量。设3次重复,结果取平均值,利用Excel进行数据处理。
1.2.4 不同接种浓度下软腐菌在魔芋根表吸附量和根部侵入量测定 用无菌水分别配制浓度为6×104、6×105、6×106、6×107、6×108个/mL的细菌悬浮液,取50 mL相应值的细菌悬浮液放入250 mL培养瓶中,将魔芋苗放入其中,根部完全浸没到悬浮液中,每个处理3棵魔芋苗,置于30 ℃的光照培养箱内,在浸根接种后0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 h分别剪取幼根,测定不同接种浓度条件下软腐菌根表吸附量和根部侵入量。设3次重复,结果取平均值,利用Excel进行数据处理。
1.2.5 LPS和EPS的吸附和抑制试验 取6×108个/mL浓度细菌悬浮液1 mL加入1 000 mL NA液体培养基,在30 ℃,200 r/min条件下培养18 h,按Baker 等的酚水法提取LPS[5]。按Husain酒精沉淀法提取EPS[6]。参照董汉松等[7]的方法,用LPS和EPS分别对幼苗进行浸根处理,以无菌水作为对照,30 ℃条件下,30 min 后用pH 7.0细菌悬浮液(6×108个/mL) 接种,以不做预处理的接种为对照。30 ℃ 测定幼苗接种1 h 和6 h 后软腐菌对根表吸附量和根部侵入量。设3次重复,结果取平均值,利用Excel进行数据处理。
1.2.6 EPS和LPS对菌体的吸附和抑制试验 无EPS和无EPS及LPS菌体悬浮液制备参考董汉松等[7]的方法。分别用浓度为6×108个/mL无EPS及无EPS及LPS的细菌悬浮液处理魔芋苗,以未处理6×108个/mL的细菌悬浮液处理魔芋苗。30 ℃ 测定幼苗接种1 h 和6 h 后软腐菌对根表吸附量和根部侵入量。设3次重复,结果取平均值,利用Excel进行数据处理。
1.2.7 根表吸附量和根部侵入量测定方法及根表吸附量测定[8] 每株每次剪取1条幼根,距离幼根末端约2 cm,将截取的根尖浸入5 mL无菌水中,涤荡1 min后,取出根尖,用灭菌滤纸吸干外表水分,称质量,用稀释平板法统计悬浮液中的细菌数量,即为软腐菌的根表吸附量。根部侵入量测定[8]:将称重后的根尖放入5 mL无菌水中,磨碎,用平板计数法计数悬浮液中的细菌数量,即为软腐菌的根部侵入量,计算公式为:吸附或侵入量(个/g鲜质量)=细菌浓度(个/mL)×分离用水量(mL)/根质量(g鲜质量)。
2 结果与分析
2.1 温度对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响
由图1和图2可知,在整个温度梯度中,随温度升高,根部吸附侵入量逐渐增高,当温度升至30 ℃时,根部吸附和侵入量最高,35 ℃时根部吸附和侵入量逐渐降低,这可能因为软腐菌的最适生长温度为28 ℃,高温抑制了病菌的生长,所以根部吸附侵入量降低。在所有温度梯度范围内,菌株的吸附侵入量都随时间的延长呈上升趋势。方差分析表明,不同温度下软腐菌在魔芋根部吸附侵入有极显著差异(P<0.01)。
2.2 pH对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响
从图3和图4可以看出,pH 6.0时,魔芋苗根部吸附侵入软腐病病量均最高,这可能是因为魔芋软腐菌最适生长pH为6.0~6.5。对在不同pH条件下的魔芋苗根部吸附侵入软腐病病量进行方差分析,结果表明,不同pH值条件下菌株在魔芋根部吸附侵入软腐病量都具有极显著影响(P=0.0001<0.01)。
2.3 不同接种浓度对软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入的影响
不同接种浓度条件下软腐菌在魔芋苗根部吸附侵入量由图5和图6可知,随着接种浓度的增加,软腐菌吸附侵入量也增加,对菌株在不同接种浓度时的根部吸附侵入量进行方差分析,结果表明,不同接种浓度下软腐菌在魔芋根部吸附侵入量具有极显著差异(P=0.0001<0.01)。
2.4 软腐病菌LPS和EPS对病菌的吸附抑制效应
LPS和EPS预处理魔芋根系对随后接种菌吸附侵入量的影响如表1所示,LPS对软腐菌的根表吸附和根部侵入都有一定的抑制作用,使其根表吸附量和根部侵入量都有不同程度的下降;但EPS对寄主根系预处理后,对接种菌并无明显的吸附抑制或增强效应。
2.5 洗去EPS及洗去EPS和LPS的菌体对魔芋根部的吸附侵入量
从表2可以看出,洗去EPS/LPS的软腐菌菌体对魔芋根部的吸附侵入量比洗去EPS高,洗去EPS/LPS和洗去 EPS的软腐菌菌体对魔芋根部的吸附侵入量比菌液处理的低。
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