摘 要：本试验采用ISSR技术对12份樱桃种质资源的遗传多样性进行了研究。筛选出6条ISSR引物对供试材料进行扩增，共检测到48个遗传位点，包含44个多态性位点，多态性位点百分率为91.67%。材料间遗传相似系数为0.29～0.98，平均为0.65。当阈值为0.58时，供试样品可分为3个组，即组Ⅰ、组Ⅱ和组Ⅲ。遗传相似性分析结果显示材料间具有丰富的遗传多样性。

　　关键词：樱桃；遗传多样性；ISSR

　　中图分类号：S662.501 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2014）11-0012-03

　　樱桃为蔷薇科（Rosacea）李属（Prunus）樱桃组植物，多分布在亚洲和欧洲[1]，全世界樱桃组植物约有120种以上，主要分布于北半球温和地带。中国栽培樱桃已有3000多年的历史。我国栽培的樱桃可分为四大类，即中国樱桃、甜樱桃、酸樱桃和毛樱桃[2]，其中以中国樱桃和甜樱桃为主要栽培对象。我国樱桃种质资源丰富，华北、华中及两广地区皆有分布，尤以浙江、山东、河南、江苏、陕西、四川、安徽、河北分布最多，为充分挖掘樱桃种质资源提供了天然条件[3，4]。

　　ISSR（Inter-simple sequence repeat） 是Zietkiewitcz等于1994年发展起来的微卫星基础上的分子标记[5]，是一种简单重复序列之间扩增多态性分子标记。其利用基因组中有关SSR序列信息，引物的开发较SSR引物简单，且可以在不同的物种间通用，不像SSR标记一样具有较强的种属特异性。ISSR分子标记不仅具有SSR标记的稳定性且揭示的多态性较RAPD高[6，7]，是一种非常理想的分子标记技术，目前已广泛用于植物品种鉴定、遗传作图、遗传多样性及分子生态学研究。本试验采用ISSR标记技术对山东省部分主栽樱桃品种和砧木资源进行检测，并分析其遗传背景差异，对樱桃资源的科研、生产具有重要的实际应用价值和科学价值。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验材料

　　试验所用材料均于2014年4月采自山东省果树研究所樱桃品种资源保存圃，所用12份材料均为目前生产上的主要栽培品种。随机采取健康嫩叶迅速于液氮中冷冻，放于-80℃冰箱保存备用。样品编号及品种见表1。

　　1.2 模板DNA的制备

　　采用改良CTAB法[8]提取叶片的基因组DNA，用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测其质量。稀释DNA至终浓度10 ng/μL，-20℃储存备用。

　　1.3 ISSR反应

　　ISSR引物委托上海生工生物工程股份有限公司合成，筛选出6条用于PCR（表2）。核心期刊PCR扩增体系为20 μL，其中10 × buffer （含Mg2+） 2 μL，2.5 mmol/L dNTPs 1.6 μL，10 μmol/L Primer 1 μL，2.5 U/μL Taq聚合酶0.4 μL，10 ng/μL DNA模板1 μL 和无菌ddH2O 14 μL。PCR 反应程序为95℃ 5 min；95℃ 1 min，48℃ 1 min，72℃ 1 min，35 个循环；72℃ 10 min，程序结束后进入4℃保存。PCR扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离检测，于紫外灯下观察，并拍照保存。

　　1.4 数据统计分析

　　将所获得的电泳谱带进行数字化统计，按照图谱中同一位置条带的“有”、“无”进行统计，有带标记为“1”，无带标记为“0”，仅记录重复性好、条带清晰且片段为200～750 bp 范围内的扩增带。将DNA扩增带数据输入到数据矩阵，通过NTSYSpc（version 2.11 a）采用非加权类平均法（UPGMA）进行聚类分析建立聚类图，并计算遗传相似系数。

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