[FK（W2][TZTTtif][FK）]
　　的结果相似，进入稳定期酶活性增加速率则逐渐超过在基本培养基中速率，最高为9 200 U（图2）。
　　[FK（W0][TZTT2tif][FK）]
　　B subtils（pEB-43-bgaB）在富营养培养基条件下，β-半乳糖苷酶活性与E coli DH5α（pEB-amy-bgaB）在在富营养培养基条件下相似，对数前期开始表现，随着菌量增长活性迅速提高，稳定期后逐步平稳，最高可达9 550 U，在稳定期后随着菌群衰退酶活性下降（图3）。
　　[FK（W0][TZTT3tif][FK）]
　　E coli DH5α（pEB-amy-bgaB）在添加%可溶性淀粉诱导条件下，β-半乳糖苷酶活性可达 000 U；而在添加%葡萄糖以及无诱导条件下酶活很低，最高只有30 U。B subtils（pEB-amy-bgaB）在无诱导条件下β-半乳糖苷酶活性略高（750 U）。
　　3讨论
　　本研究通过检测β-半乳糖苷酶活性，研究了启动子43及amy在B subtils和E coli中的转录活性。本研究发现43转录合成的β-半乳糖苷酶活性，在（pEB-43-bgaB）和（pEB-43-bgaB）中的结果相似，对数前期开始表现，随着菌量增长活性迅速提高，稳定期逐步平稳，同样在稳定期后随着菌群衰退，酶活性下降。在B subtils（pEB-43-bgaB）中β-半乳糖苷酶活性可达9 500 U以上。本研究结果与Ye等在质粒pUB0基础上，以枯草杆菌WB700为宿主菌，利用43启动子和果聚糖蔗糖酶信号肽，在普通培养条件下分泌表达葡萄球菌激酶的结果基本一致[6]。启动子43在E coli中，β-半乳糖苷酶转录的水平可达9 200 U，这可能是由于E coli RNA聚合酶σ70与B subtils σ43具有同源性[6-0]，能够识别结合启动子43，使之在E coli中同样能转录。因而可利用启动子43先在E coli中表达检测外源基因，再转入B subtils中表达。
　　序列分析比对发现43序列与σ43和σ37的识别序列并不完全保守，σ43和σ37识别序列的保守性显然与启动子的高活性不相符。因而Wang等推测在σ43和σ37识别序列之外还存在其他能够影响启动子活性的因素[8]。在本实验室，另一研究将启动子43的核糖体结合序列删除后，替换上原核典型的核糖体结合序列，发现其转录效率仍然较高，说明影响因素可能不是核糖体结合序列。
　　本研究发现不同营养条件可影响启动子43的转录活性。对数前期，在基本培养基和富营养条件下启动子43的转录活性差异不大；进入稳定期后，出现差距，43在基本培养基转录表达的β-半乳糖苷酶活性增长逐渐进入了平稳期，而富营养条件下其活性增长率依然很高，持续向上增长。这种差异可能由于启动子43转录效率较高与合成mRNA及蛋白质原料有限之间的矛盾引起。对数前期及对数期，菌量小，营养充足，差异不明显，进入稳定期后，随着菌群扩大及启动子43高效率转录，营养矛盾造成的差异逐步突出，因而优化营养条件有助于提高启动子43的转录活性。
　　启动子amy在E coli中转录活性较低，β-半乳糖苷酶活性在诱导条件下最高为 000 U。活性弱的原因可能是虽然启动子amy也是由B subtils RNA聚合酶σ43识别转录，但对E coli的σ70因子亲和性低，因而在E coli中转录水平低；另一原因也可能是携带α-淀粉酶的信号肽的β-半乳糖苷酶融合元，在E coli胞内未能切除信号肽，以无活性的蛋白形式存在。启动子amy在B subtils中转录活性本身可能就不太高，Gat以绿色荧光蛋白为报告基因，利用B subtils WB600和pUB0衍生载体，发现amy活性较低。因此amy的序列还有待改造提高其活性。
　　[HS2][HT85H]参考文献：[HT8SS]
　　[ZK（#]徐友强，马翠卿，陶飞，等 细菌启动子识别及应用研究进展 生物工程学报，200，26（0）：393-403
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