泰半夏小块茎的诱导及工厂化育苗研究
摘要:以泰半夏的无菌叶片、叶柄为材料,通过愈伤组织分化不定芽途径,建立泰半夏工厂化育苗植株再生体系。结果表明,以叶片、叶柄为外植体,愈伤组织最适诱导培养基分别为:MS2,4-D 05 mg/L6-BA 30 mg/L、MS05 mg/L 2,4-D20 mg/L 6-BA ;愈伤组织在相同培养基中增殖后诱导小块茎分化的最适培养基为:MS2 mg/L 6-BA。/2MS0%活性炭05 mg/L NAA培养基产生的根较粗壮、浓密。
关键词:泰半夏;块茎诱导;育苗
中图分类号:S567239043文献标志码: A
文章编号:002-302(204)2-0067-03
半夏(inellia ternate)别称野芋头,为天南星科多年生草本植物,以其干燥块茎入药,性温、味辛、有毒,具有降逆止呕、消痞散结等功能,是我国传统中药材。生长于江苏省泰州地区的半夏被称为泰半夏,具有个大、质坚实、色白、粉性足等优良性状,是当地著名的道地药材。泰半夏多产于旱作的高沙土农田中,以野生状态生存。随着种植制度的改革、旱改水面积的扩大,以及化肥、农药、除草剂的广泛使用,泰半夏野生资源已处于濒危状态,不能满足用药需求。人工栽培半夏用种量较大,加上生产退化等问题均导致半夏供应长期处于紧缺状态。因此,研究新的繁殖技术对于保护泰半夏道地药材种质资源有着积极意义。目前,泰州地区通常采用半夏块茎或珠芽进行繁殖,但因存在繁殖能力低及品种退化等问题而限制了泰半夏产量、质量的提高。半夏分布范围较广,近年来湖北省荆门市、甘肃省西河县、贵州省、云南省、湖南省、四川省、安徽省等地都陆续展开了保护当地道地半夏药材资源的组培研究,以块茎、叶片、叶柄或珠芽等为外植体,得到半夏的再生植株[2-]。本试验以从块茎为外植体获得的泰半夏无菌苗为材料,建立适宜工厂化生产的再生体系,以期保护泰州半夏种质资源,为泰半夏的工厂化育苗及规模种植奠定基础。
材料与方法
材料
试验材料为泰半夏组培苗,野生半夏块茎外植体采自江苏省泰兴市。选择生长旺盛、无病虫害的健壮植株的块茎,用自来水洗净,流水冲洗30 min以上。用75%乙醇充分浸没30 s,无菌水冲洗后再用0%HgCl2溶液充分浸泡0~6 min,无菌水反复漂洗6~8次。将块茎切成05~08 cm的小块,接种于诱导培养基上,形成无菌苗。
2方法
2外植体的处理
以半夏组培苗叶片及叶柄为外植体,无菌条件下,剪取生长一致的无菌苗顶部完全展开的幼嫩叶片,切成~2 cm的小块,近轴面朝下接种于诱导培养基中;从生长良好的无菌苗上剪取叶柄接种于诱导培养基中。
22基本培养基及培养条件
愈伤组织的诱导及不定芽分化培养基以改良MS为基本培养基,附加30 g/L蔗糖及 7 g/L 琼脂,pH 值为58。块茎启动培养基为MS附加 02 mg/L NAA、2 mg/L 6-BA。生根培养以/2MS为基本培养基,附加5 g/L蔗糖、7 g/L琼脂、05 g/L活性炭,pH 值为58,2 ℃高压灭菌5 min。愈伤组织诱导、分化及不定芽生根培养均在以下环境中进行:培养温度(25±2) ℃,光照时间4 h/d,光照强度2 000~2 500 lx。
23激素处理
将无菌叶柄、叶片分别接种于不同生长调节物质组合的培养基中,采用完全随机设计。每处理6瓶,每瓶接种5个外植体,培养室培养。定期观察小块茎诱导及生长情况,2 d后统计愈伤组织诱导率。诱导率计算公式如下:
诱导率=诱导产生愈伤组织的外植体数/接种外植体总数×00%。
将诱导产生的愈伤组织切成03~05 cm的小块,接种至不定芽诱导增殖培养基上,培养25 d后统计小块茎平均诱导数量。
24生根与壮苗
待丛生芽苗长至3~4 cm时,将其分株转移到不同生根培养基中,接种2 d后观察并记录不同处理对植株生根的影响。每处理6瓶,每瓶5株试管苗。
25炼苗与移栽
待根长至~2 cm时炼苗移栽。移栽基质设4种:A:园土;B:珍珠岩 ∶[KG-3]泥炭 ∶[KG-3]沙= ∶[KG-3]2 ∶[KG-3]2;C:育苗基质;D:育苗基质 ∶[KG-3]园土= ∶[KG-3]。
2结果与分析
2不同激素对泰半夏愈伤组织诱导的影响
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