依赖解旋酶DNA等温扩增技术的研究进展(2)
4 HDA技术的优缺点
4.1 HDA的优点
和其他的等温基因扩增技术比较,HDA技术更加的简便、高效、快速,是一种正真做到在恒温下进行反应的扩增技术。HDA扩增的反应时间75~90分钟,整个反应在恒温下进行,只需要恒温水浴锅这一简单仪器,与其他基因扩增技术相比,适用于基层实验室对疾病的快速检测与诊断。HDA反应除去了5′~3′外切酶活性的BstDNA聚合酶,该操作不容易产生非特异性的扩增,增加反应的敏感性。
4.2 HDA的缺点
HDA是近几年新发明的一种等温基因扩增技术,研究者较少,且发展还不够成熟,目前还没有在基因扩增等方面的应用。
5 应用与展望
与其他技术相比,HDA技术简便、高效、快速,适用性广泛,在实时定量方法、凝胶电泳和ELISA实验中都可应用,同时适用于基层实验室对疾病的快速检测与诊断。已有研究通过对HDA体系的优化,成功建立了RT-tHDA检测方法。有研究表明,HDA能够扩增cDNA、微生物基因组DNA等基因片段,因其具有简便性、高效性、快速性等优点,该方法具有广阔的研究和发展前景。因为HDA的反应是完全在恒温下进行,特别适用于基层实验室,随着HDA这种等温扩增技术的快速发展,会有专门适于HDA操作的简单仪器出现。
HDA技术是模拟动物体内DNA的合成方式,具有高保真性和高敏感性。2006年New Englang Bio-labs在HDA的原有的基础上又发明了一种新的检测方法,即环HDA法,该方法不但可扩增大分子DNA片段,还可直接扩增完整的cDNA。该方法的发现为分子生物学再一次提供新的科研手段。该方法使基因的扩增和基因的筛选同时完成,分析和构建质粒DNA的时间逐步减少,更加有效的加快了反应的速度并且提高了DNA的产量。cHDA法利用T7基因4蛋白使反应温度仅在25℃反应,因此在室温条件下即可完成扩增,不需要加热,操作更加简单方便。
目前已经有对腹泻性梭状芽胞杆菌用HDA方法检测的报道。但HDA这种新型的等温扩增技术受DNA解旋酶结合、延伸长度和解旋速度影响,模板靶序列超过400bp会显著降低扩增效率,DNA解旋酶对扩增效果影响很大,今后的研究重点将是如何筛选出优质的DNA解旋酶。
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