3讨论

　　胰腺癌是一种临床表现隐匿、发展迅速和预后不良的消化道恶性肿瘤，手术切除率仅为25%左右，化疗在胰腺癌的综合治疗中占有重要地位，顺铂、5-氟尿嘧啶（5-FU）作为胰腺癌常规化疗药物，其疗效并不令人满意[3]。

　　研究表明，绝大多数化疗药物是通过损伤细胞DNA诱导肿瘤细胞凋亡而起作用的[4]。肿瘤细胞凋亡与细胞周期检测点密切相关，当细胞周期检测点发生异常，经化疗药物发生DNA损伤的肿瘤细胞则不会发生凋亡，进入下一个运行周期继续增长，这正是肿瘤细胞对许多化疗药物不敏感的主要原因之一[5]。因此，如何恢复细胞周期检测点的正常功能，加强检测点关键调控（基因）蛋白对肿瘤细胞的正常监测（凋亡诱导）是增强化疗药物敏感性亟待解决的关键环节之一。

　　多项研究表明，Plk-1在胰腺癌、直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌甲状腺癌、鼻咽癌、子宫颈癌、肝转移癌及前列腺癌组织中过表达，其过表达与肿瘤组织分级、恶性程度及预后密切相关[6-11]。因此，本研究设想通过上调胞浆内成熟Plk-1活性分子表达，以期探讨Plk-1是否可以作为促进化疗抵抗的胰腺癌细胞凋亡药靶。本研究借助RT-PCR从AsPC-1细胞中扩增获得成熟型Plk-1基因片段，将其定向克隆入pcDNA3.1质粒载体，经酶切、PCR及测序鉴定，证实成功构建pcDNA3.1/Plk-1胞浆表达型重组体（图1、2）。进一步通过FCM分析转染pcDNA3.1/Plk-1对化疗药物所致AsPC-1细胞凋亡的影响，结果显示：单独转染pcDNA3.1/Plk-1，仅能诱导较少细胞凋亡；但转染pcDNA3.1/Plk-1与化疗药物联合作用（图3），凋亡率明显低于未转染药物处理组及转染空载体药物处理组，其差异有高度统计学意义（P<0.01）；而空载体转染非药物处理组与未转染非药物处理组细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）。表明胞浆表达成熟Plk-1活性分子能明显降低GEM所致细胞凋亡（图6）。采用MTT法测定转染Plk-1对GEM介导的AsPC-1细胞生长抑制作用，由图5可以看出，不同浓度GEM作用后，转染pcDNA3.1/Plk-1后的AsPC-1/Plk-1细胞生长抑制率明显低于空白AsPC-1细胞及转染空载体pcDNA3.1的AsPC-1/pcDNA3.1细胞，说明过表达Plk-1基因可以降低GEM对胰腺癌AsPC-1细胞的生长抑制作用，提示胞浆过表达Plk-1能明显降低AsPC-1细胞对化疗药物的敏感性。

　　综上所述，过表达Plk-1活性分子可能与胰腺癌化疗药物敏感性紧密相关，过表达Plk-1活性分子在胰腺癌的耐药过程中发挥重要作用，Plk-1可能作为增强胰腺癌化疗药物敏感性的重要靶点。

　　[参考文献]

　　[1]JiangL，HuangY，DengM，etal.Polo-likekinase1inhibitstheactivityofpositivetranscriptionelongationfactorofRNAPolIIb（P-TEFb）[J].PLoSOne，2013，8（8）：72289.

　　[2]YuC，ZhangX，SunG，etal.RNAinterference-mediatedsilencingofthepolo-likekinase1geneenhanceschemosensitivitytogemcitabineinpancreaticadenocarcinomacells[J].JCellMolMed，2008，12（6）：2334-2349.

　　[3]AnsariD，TingstedtB，AnderssonR.Pancreaticcancer-costforovertreatmentwithgemcitabine[J].ActaOncol，2013，52（6）：1146-1151.

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　　[5]ZhangY，LiuY，YangYX，etal.TheexpressionofPLK-1incervicalcarcinoma：apossibletargetforenhancingchemosensitivity[J].JExpClinCancerRes，2009，28：130.

　　[6]ZhouQ，SuY，BaiM.EffectofantisenseRNAtargetingPolo-likekinase1oncellgrowthinA549lungcancercells[J].JHuazhongUnivSciTechnologMedSci，2008，28（1）：22-26.

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　　[11]ShiW，AlajezNM，BastianuttoC，etal.SignificanceofPlk-1regulationbymiR-100inhumannasopharyngealcancer[J].IntJCancer，2010，126（9）：2036-2048.

 

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