【摘要】目的探讨实弹演习火炮打击后，不同位置掩体保护下兔脑组织病理及NMDA-R1表达的变化。方法闽南山地团进攻演习，30只实验兔随机分为空白对照组，反角隐蔽组和迎面隐蔽组。火炮打击应激损伤后6h，各组存活兔取脑组织，观察其病理损伤形态学及NMDA-R1表达的变化。结果与空白对照组比较，反角隐蔽组和迎面隐蔽组NMDA-R1表达强阳性，脑组织结构层次被破坏，神经细胞变性坏死，间质出血；迎面隐蔽组NMDA-R1免疫反应强度亦高于反角隐蔽组。结论火炮打击后兔脑组织应激损伤反应强烈，反角掩体保护能够减轻脑组织损伤，NMDA-R1参与脑组织损伤病理过程。

　　【关键词】火炮打击；兔；应激防护模型；脑组织；NMDA-R1

　　正常情况下机体的应激反应是有利的，有助于机体快速适应内外环境因素的变化，但过大过长的应激反应会对机体产生有害的影响，产生病理性应激[1]。病理性应激是机体对严重应激因素（如创伤、打击、爆炸等）的一种异常反应，其生理过程主要表现为下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamo-pituitary-adrenal，HPA）轴神经内分泌调节功能紊乱，导致持续过度的糖皮质激素升高[2]。近年来，人们发现N-甲基-D-天冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartatereceptor，NMDAr）的变化与创伤后神经-内分泌-免疫功能紊乱的发生机制有关[3]。本课题通过建立火炮打击兔应激防护模型，进行应激状态下兔脑组织病理变化及NMDA-R1表达的形态学研究，现报告如下。

　　1材料与方法

　　1.1主要仪器、动物及试剂团进攻炮火覆盖火力类型：武装直升机火箭弹、XX自行榴弹炮、XX牵引加农炮、XX自行火箭炮、水陆两栖坦克、XX轮式突击炮、XX迫击炮、XX反坦克导弹。健康成年日本大耳白兔30只，雌雄不拘，清洁级，体质量2.5～3.0kg（厦门大学医学院动物中心提供），随机表法分为3组，空白对照组6只，反角隐蔽组6只，迎面隐蔽组18只（距离攻击目标10m隐蔽组6只，20m隐蔽组6只，30m组隐蔽6只）。

　　1.2实验方法按照文献[4]方法设计实验，实验时间和环境条件为南方秋季中午山地环境，环境温度16℃～28℃，湿度43%～65%。实验兔常规喂养，演习当日凌晨运至目标高地，炮靶前迎面10m、20m、30m处挖掘约1m深掩体，各放置实验兔6只，上覆盖硬质木板、松枝，留通气道。炮靶后反角10m处挖掘同样掩体，放置实验兔6只。空白对照组于炮靶阵地外10km营区喂养。中午演习开始，全过程2h。轰炸机俯冲（未投弹），持续火炮急袭5min。各型火炮、坦克、导弹、武装直升机集群连续发弹若干，期间暂停两次，各10min。演习结束，工兵排爆清理阵地后进场取回实验兔。伤后6h处死存活兔解剖，取脑组织标本，4%甲醛固定。

　　1.3脑组织病理检测取4%甲醛固定脑组织，石蜡包埋，切片行HE染色，光镜下观察形态学变化，由同一病理医生采用盲法评价。观察脑组织结构层次是否完整，神经细胞肿胀、变性、坏死，间质出血、水肿等情况。

　　1.4脑组织NMDA-R1免疫组化表达的测定取4%甲醛固定脑组织，石蜡包埋，连续切片（4μm），每例标本切5张免疫组化染色用。采用改进型SP法进行免疫组化染色，严格参照试剂盒说明操作。试剂盒型号，购于XX公司。每次染色时均用已知阳性切片作阳性对照，用PBS（磷酸缓冲液，0.01mol/L，pH值7.2）代替一抗作阴性对照。NMDA-R1表达均位于胞质和胞核内，表现为浅黄、棕黄或棕褐色。用半定量法评估其染色，无阳性细胞数为（-），阳性细胞数25%以下为（+），25%～50%为（++），51%～75%为（+++），超过75%为（++++）。

　　2结果

　　2.1兔一般情况各组实验兔均无直接火力命中。与空白对照组比较，反角隐蔽组实验兔全部存活，部分精神萎靡，反应迟钝，伏地，少部分耳道出血。因弹着点不规律，迎面隐蔽3组距离无差异，合并为1组。迎面隐蔽组18只实验兔当场死亡9只，至伤后6h取脑组织标本前再死亡3只，死亡率达66.7%（12/18）。剩余6只存活实验兔编为迎面隐蔽组，与另外两组同时刻点取脑组织进行病理形态学及组化检测，每只取五张切片进行组化表达强度及形态学观察研究。

　　2.2脑组织HE染色结果空白对照组脑组织切片HE显示，分子层，内、外颗粒层及锥体细胞层结构完整，均匀致密；锥体细胞数量丰富，胞体致密，核居中，轴突完整、干净，向四周延伸；间质为少量血管及白质，肌浆深染，胶质丰富，可见散在分布血管，腔内可见少量红细胞，未见炎症细胞（图1、图2）。反角隐蔽组脑组织切片HE显示，分层结构存在，锥体细胞数量减少，胞体稍肿胀，可见空泡变性，轴突断裂；细胞间少量红细胞分布，间质少量炎细胞浸润（图3、图4）。迎面隐蔽组脑组织切片HE染色显示，细胞结构层紊乱，分界不清，部分坏死，崩解；细胞数明显减少，胞体肿胀，体积增大，轴突消失，白质稀疏；间质充血，可见散在红细胞分布及浆细胞浸润（图5、图6）。

　　2.3脑组织NMDA-R1免疫组化的表达各组神经元锥体细胞中均有NMDA-R1表达，主要在神经元膜表面表达，免疫反应强度有差异。空白对照组可见神经元形态完整、胞膜淡染，NMDA-R1蛋白少量表达（+）（图7、图8）。反角隐蔽组可见神经元胞体肿胀，细胞数量减少，细胞膜典型黄染，NMDA-R1中量表达（++）（图9、图10）。迎面隐蔽组，可见大量神经元坏死崩解，残存神经元形态数量稀少，胞体肿胀，体积巨大，胞核溶解，大部分胞质、胞膜均黄染，色深，NMDA-R1大量表达（++++）（图11、图12）。迎面隐蔽组、反角隐蔽组NMDA-R1免疫反应强度均高于对照组，同时迎面隐蔽组NMDA-R1免疫反应强度亦高于反角隐蔽组。

期刊库（http://www.zgqkk.com），是一个专门从事期刊推广、投稿辅导的网站。
　　本站提供如何投稿辅导，寻求投稿辅导合作，快速投稿辅导，投稿辅导格式指导等解决方案：省级投稿辅导/国家级投稿辅导/核心期刊投稿辅导//职称投稿辅导。

　　【免责声明】本文仅代表作者本人观点，与投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站无关。投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。