2.4记录膈神经放电 ①钩挂膈神经：把大鼠连同鼠板移入铜网屏蔽室，使用立体定位仪将大鼠固定在实验台上（以便观察中枢微量注射药物对膈神经放电的影响），利用鼠板上的立柱，穿线钩挂，做好皮兜，充分暴露膈神经，滴加石蜡液浸泡神经。将钩状铂铱合金双极电极固定于三维调节器上，移动调节器，使电极接近膈神经，勾住膈神经后再轻轻抬起电极。②放电记录：打开Biopac 16导电生理记录系统（美国），设置好电极对应的通道（通道A1至A16分别对应1-16个通道，采集信号可以通过硬件上的通道选项选择；从MP150菜单中选择Setup Channels，通过出现的Input Channels对话框设置采集信号的通道。），指定采集设置（包括：数据存储、采集速率、采集持续时间等参数），点击START按钮，可见膈神经呈簇状放电（见图1）。使用结束后要及时保存数据，关闭电源。

　　3注意事项及实验体会

　　3.1 麻醉 啮齿类动物对急性缺氧的耐受性较低，对麻醉药所致呼吸抑制作用比较敏感，麻醉过深易造成实验动物发生呼吸抑制，如不能尽快完成气管插管极易致实验动物死亡；麻醉过浅则可能在插管及后面的膈神经分离过程中造成强烈应激，严重影响动物的生理状态。因此麻醉时，力争一次麻倒大鼠，这就需要在老师的指导下认真操作，大鼠要抓牢，进针位置要靠大鼠下腹部，注射器针体要倾斜30°左右，进针1cm后回抽无血、无阻塞再注射药液，确保药物进入腹腔。实验过程中，当麻醉程度降低时要及时追加麻药（颈外静脉插管补充麻药），保持偏深的麻醉状态。往往在做完手术正式引导膈神经放电时，动物开始清醒，出现挣扎，这时也最容易损伤膈神经，所以应追加麻药，以免影响实验结果。

　　3.2气管插管 颈部切口要正中，颈部肌肉和筋膜时要钝性分离，尽可能找到肌缝，分开即可见到气管，一定要避免损伤血管，引起大出血和过多组织液渗出；实验前要多准备些粗细不等的气管插管，根据实验鼠的体重范围选择相应直径的插管，插管要尽量轻柔、快速，因为插管本身对气管壁就是个很强烈的刺激，易使气道分泌物增多，插管内或气道内黏液阻塞，引起大鼠窒息。插管过程中要紧密关注大鼠状况，若气道分泌物增多，应及时用细纸条或注射器针头清理。

　　3.3分离膈神经 找准并成功分离膈神经是记录膈神经放电实验的关键步骤。寻找膈神经时紧贴颈总动脉分离，找到白色成束状向前肢方向移行的臂丛，斜搭在臂丛根部的与气管平行、状如头发丝且透明有弹性的神经即为膈神经。分离时应把神经周围的结缔组织分离干净，分离过程要小心仔细，注意保护神经，不能用金属划神经，以免损伤，滴加生理盐水，防干。勾挂膈神经时把事先放置在膈神经下方的手术线轻轻提起，拉动膈神经轻轻搭在电极上，使电极悬空，不要触及周围的肌肉等组织。

　　3.4神经放电记录过程中的干扰排除 干扰的来源是多方面的，首先要确定其来源是物理性的还是生物性的[3]，其次是利用引导电位的路径采用摒除、隔离分析等方法寻找干扰来源，要有针对性地逐一排除。①静电及电磁干扰的排除：静电及电磁为常见干扰，采用屏蔽室、屏蔽网进行屏蔽，对电源线路尽可能屏蔽，且所有屏蔽材料均需接地。将地线与引导线远离带电流的导线，记录仪器的输入部分远离静电场或电磁场，且仪器本身也要通过外壳接地。注意交流电50Hz的影响，屏蔽室内不要设置带电源的未进行屏蔽的物体，如台灯、日光灯、实验台的保温装置等，确因需要，也尽量在记录时关闭。②生物性干扰的排除：实验动物可通过切口附近引导接地。尽量使实验动物处于深度麻醉，此时，动物呼吸平稳、肌肉松弛，要使实验动物处于良好的状态，记录时间长时要保温、补液，神经要浸泡在预温的石蜡油中，防止实验标本逐渐干燥。膈神经上不能有血块、毛发等杂质附着。

　　3.5 神经放电信号的辨认 很多同学在一开始容易把干扰信号误当作膈神经放电，膈神经放电的基本特征是：在背景放电（噪声）的基础上，成束的节律性放电，而且可观察到电脑屏幕上的放电波形与动物的吸气运动以及监听器中发出的放电声音三者同步。

　　参考文献：

　　[1]赵春玲，冯志强，陈燕，等.大鼠膈神经和迷走神经放电以及呼吸和心电图同步记录技术[J].泸州医学院学报，2007，30（2）：90-91.

　　[2]卢记明，张炳熙.大鼠气管插管方法学概述[J].中国比较医学杂志，2009，19（8）：76.

　　[3]李小英，罗荣敬，周乐全，等.电生理实验中的常见干扰及其排除方法[J].中华临床医学研究杂志，2005，11（14）：2096.编辑/王海静

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