[摘要] 目的 采用高效液相色谱法测定六叶龙胆不同部位的龙胆苦苷含量，比较不同部位龙胆苦苷的含量。 方法 CAPCELL PAK C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；流动相为甲醇-0.5%乙酸水溶液（25∶75）；检测波长为270 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为32℃。 结果 龙胆苦苷在0.5～6.9 μg范围内呈线性关系，回归方程为Y=1.2908×106X+4.8047×104，相关系数（r）=0.9999，测定方法的平均回收率为98.56%，RSD = 1.01%（n = 6）。龙胆苦苷含量测量结果为：花>根>茎>叶>枯龙胆。 结论 本研究所采用的高效液相色谱法快速简便，准确，精密度好；六叶龙胆不同部位中龙胆苦苷含量有较大差异。

　　[关键词] 高效液相色谱法；六叶龙胆；不同部位；龙胆苦苷

　　[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210（2014）09（a）-0095-04

　　龙胆科龙胆属植物全世界约有400余种，我国有240余种，分布遍及全国[1]。六叶龙胆（Gentiana hexaphylla Maxim. ex Kusnez.）为龙胆科龙胆属的多年生草本植物。六叶龙胆出自《青藏药鉴》，书中记载藏药名称为吉解那保。主要分布在中国内地的甘肃、西藏、青海、四川、陕西秦岭等高海拔地区，主要生长在海拔2500～3500 m的山坡草地、路旁、高山草甸及灌丛中[2]，是秦岭北坡关中中部的习用草药之一，目前尚未由人工引种栽培，蕴藏量较大。

　　已有文献报道称龙胆科植物的主要活性成分为环烯醚萜苷类化合物，包括龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苦苷及獐芽菜苷等[3]。其中具有强烈苦味活性的龙胆苦苷是其主要有效成分之一，是龙胆药苦寒的物质基础[4]，具有保肝、利胆、抗炎、抗过敏、健胃等多种药理作用，是评价龙胆药材质量的重要指标[5-6]。

　　近年来龙胆商品药材使用量加大，但由于长期无序采挖导致野生资源锐减，部分地区资源枯竭[7]。为扩大药用资源，本文对六叶龙胆不同部位的主要化学成分龙胆苦苷含量做了比较，对今后合理开发利用这一药用植物资源提供指导。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　岛津 LC-20AD 型液相色谱仪；色谱柱；CAPCELL PAK C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；电子分析德国赛多利斯Sartorius BP系列天平；KQ500DE台式数控超声波清洗器；大德药机摇摆式离心机。

　　1.2 材料与试药

　　本文所采用实验材料六叶龙胆均采自秦岭，采挖时间为7～9月份，经陕西省食品药品检验所郭耀武主任药师鉴定为龙胆科植物六叶龙胆（Gentiana hexaphylla Maxim. ex Kusnez.），其中编号1的样品采自户县光头山，编号2的样品采自周至县厚畛子，编号3的样品采自长安县终南山。

　　龙胆苦苷对照品（供含量测定用，含量以96.9%计，批号为110770-201013）购自中国药品生物制品检定所；实验过程中所用试剂均为国药“沪试”牌分析纯，流动相为色谱纯，微孔滤膜统一为0.45 μm有机系尼龙微孔滤膜，水为去离子水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：CAPCELL PAK C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.5%乙酸水溶液（25∶75）；检测波长：270 nm；流速：1.0 mL/min[8]；进样量：10 μL；柱温32℃。理论塔板数以龙胆苦苷计算应不低于4500。

　　2.2 溶液的制备

　　2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取龙胆苦苷对照品10 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，摇匀，得质量浓度为0.4 mg/mL的溶液，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，作为对照品溶液，备用[9]。

　　2.2.2 供试品溶液的制备 分取六叶龙胆干燥根、茎、叶、花、全草、枯六叶龙胆等六部分，分别放于旋转式离心机中粉碎。精密称取各部位粉末各0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 mL，称定并记录重量[10]。考虑到龙胆苦苷自身的不稳定性会导致分解从而提取率下降，故超声处理分为两阶段[11]。第一阶段超声频率设置为500 W，超声时间设置为15 min，取出自然冷却至室温，第二阶段再次超声15 min，频率设置依旧为500 W。超声结束后取出冷却至室温后称定重量，对比超声前重量记录，用甲醇补定减失重量。振摇后静置取上清液，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，作为供试品溶液[12-13]。

　　2.3 系统适应性试验

　　按上述色谱条件，将制备好的对照品溶液、供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，结果供试品溶液在与对照品溶液相同保留时间处有一致的色谱峰，且吸收峰达到基线分离，分离度均大于1.6，理论塔板数均大于4500，说明上述色谱条件适用于六叶龙胆中龙胆苦苷含量测定。见图1。

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