2.4 线性关系考察

　　分别精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20、25 μL，按上述色谱条件依次进样，以对照品进样量为横坐标，相应峰面积为纵坐标，计算得回归方程Y=1.2908×106X+4.8047×104，相关系数（r）=0.9999，计算结果表明龙胆苦苷在0.5～6.9 μg之间线性关系良好。

　　2.5 精密度试验

　　精密吸取龙胆苦苷对照品溶液10 μL，在上述色谱条件下连续重复进样5次，记录每次峰面积，计算得RSD为1.10%，表明本实验方法精密度良好。

　　2.6 稳定性试验

　　取按上述制备条件制备的对照品溶液和供试品溶液，分别精密吸取10 μL，在18 h内各进样5次，各自记录峰面积，计算得到对照品溶液的RSD值为0.55%（n = 5），结果表明对照品溶液在18 h内稳定性良好；供试品溶液的RSD值为0.98%（n = 5），表明供试品溶液在18 h内稳定性良好。

　　2.7 重复性试验

　　取同批六叶龙胆样品按上述方法平行制备6份供试品溶液，按上述色谱测定条件方法，测定，记录各自峰面积，计算RSD为1.10%（n = 6），结果表明，本方法重复性良好。

　　2.8 回收率试验

　　精密称取已知含量的六叶龙胆全草样品6份，分别精密加入龙胆苦苷对照品适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。测定并计算其各自的回收率，然后计算得到平均回收率为98.56%，RSD为1.01%（n = 6），结果表明，本实验方法可行。

　　3 讨论

　　3.1 龙胆苦苷含量测定

　　《中国药典》2010年版龙胆项下规定的龙胆苦苷含量限度龙胆不少于3.0%，坚龙胆不少于1.5%[14-16]。本文六叶龙胆测定结果根含量为1.74%，花含量为2.91%，全草含量1.02%，表明六叶龙胆确有一定的应用价值。

　　3.2 提取条件研究

　　3.2.1 提取时间的考察 按照“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法，对六叶龙胆提取时间进行考察，分为15、30、45、60 min，结果发现随着超声波提取时间的延长，提取率在30 min前呈上升趋势，30 min后趋于平缓。

　　3.2.2 料液比的考察 按照“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法，设定料液比为1∶ 40、1∶ 50、1∶ 60、1∶ 70，结果发现随着提取溶剂比例的不断加大，提取率呈上升趋势，并在料液比1∶ 50后趋于平缓。

　　3.2.3 提取条件的确定 比较静态热回流提取法、动态热回流提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等方法各自的提取率。综合温度因素对龙胆苦苷稳定性的影响，考虑到龙胆苦苷自身的对热不稳定性，可能会导致龙胆苦苷分解从而使提取率下降。最终确定提取条件为：料液比1∶ 50、超声处理两阶段。第一阶段超声频率设置为500 W，超声时间设置为15 min，取出自然冷却至室温，第二阶段再次超声15 min，频率依旧设置为500 W。

　　3.3 六叶龙胆采收时间

　　六叶龙胆根部相比《中国药典》2010年版收录的龙胆药材根部较小，其主要药理成分龙胆苦苷在六叶龙胆各个部位有所不同，其中以花中含量最大，为2.91%，根中次之，为1.74%，茎叶中龙胆苦苷含量较低，提示应在盛花期7～9月份采挖。

　　3.4 六叶龙胆入药部位

　　六叶龙胆资源主要在秦岭高海拔区域分布，六叶龙胆植株较小且全草均含有龙胆苦苷，总体含量在1.0%以上，考虑到药用植物资源的充分利用，建议以全草入药，考虑到六叶龙胆往年生的干枯植株根系中龙胆苦苷含量仅为0.1%，故建议在六叶龙胆产地加工时需把根部干枯的植株根系剔除。

　　[参考文献]

　　[1] 曹斐华，李冲.龙胆属植物化学成分及药理作用的研究进展[J].中国新药杂志，2008，17（1）：27-32.

　　[2] 青海高原生物研究所植物室.青藏高原药物图鉴[M].西宁：青海人民出版社，1976.

　　[3] 冯波，朱鹤云，关皎，等.HPLC同时测定龙胆中4种活性成分含量[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（13）：82-85.

　　[4] 郑虎占，董泽宏，余靖.中药现代研究与应用[M].2卷.北京：学苑出版社，1997：1398.

　　[5] 王建科，高言明，陈惠玲.坚龙胆中龙胆苦苷含量的测定[J].贵州农业科学，2013，41（2）：47-49.

　　[6] 袁廷伟，孙芳玲，艾厚喜，等.龙胆苦苷的研究进展及抗炎前景[J].中国药理学与毒理学杂志，2012，26（3）：425.

　　[7] 庄绪会，张超，张庆芝.昆明龙胆不同部位龙胆苦苷的含量测定[J].云南中医中药杂志，2010，31（1）：55-58.

　　[8] 杨慧玲，司庆文，侯勤正，等.HPLC法测定不同海拔长柄秦艽中龙胆苦苷、马钱酸、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷[J].中草药，2010，41（10）：1720-1722.

　　[9] 郝彩琴，冷晓红，郭鸿雁，等.不同提取方法对宁夏六盘山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响[J].西北药学杂志，2013，28（1）：13-15.

　　[10] 郭小存，朱鹤云，李兵，等. 正交设计优选龙胆中龙胆苦苷的提取工艺[J].吉林医药学院学报，2012，33（2）：78-79.

　　[11] 李超，韩永萍.响应面优化龙胆草中龙胆苦苷提取工艺的研究[J].西南民族大学学报：自然科学版，2013，39（2）：204-208.

　　[12] 赵明，孙菲，隋译.HPLC法测定复方龙胆碳酸氢钠片中龙胆苦苷的含量[J].中国医药导报，2009，6（22）：65-66.

　　[13] 张妍，丁永辉，张晓萍，等，HPLC法测定十五味龙胆花丸中龙胆苦苷和丁香酚[J].中成药，2011，33（12）：2094-2097.

　　[14] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010.

　　[15] 许秋霞，李小芳，舒予，等.干燥方法对龙胆炮制品中龙胆苦苷含量的影响[J].中国药房，2013，24（7）：622-624.

　　[16] 陈祯桢，罗珍妹.HPLC法同时测定茵胆平肝胶囊中栀子苷、龙胆苦苷、芍药苷的含量[J].中国药房，2012，23（36）：3442-3444.

---

期刊库（http://www.zgqkk.com），是一个专门从事期刊推广、投稿辅导的网站。
　　本站提供如何投稿辅导，寻求投稿辅导合作，快速投稿辅导，投稿辅导格式指导等解决方案：省级投稿辅导/国家级投稿辅导/核心期刊投稿辅导//职称投稿辅导。

---

　　【免责声明】本文仅代表作者本人观点，与投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站无关。投稿辅导_期刊发表_中国期刊库专业期刊网站站对文中陈述、观点判断保持中立，不对所包含内容的准确性、可靠性或完整性提供任何明示或暗示的保证。请读者仅作参考，并请自行承担全部责任。