【摘要】目的实验性研究壮通饮（ZTY）对DN大鼠肾小球病理改变的影响。方法采用单肾切除合并腹腔空腹注射链脲佐菌素（STZ），建立DN大鼠模型，并随机分为空白对照组、假手术组、模型组、西药组和壮通饮低剂量组、中剂量组、高剂量组7个组。治疗组每日灌胃，壮药组用壮通饮（低剂量组6.8 g/kg，中剂量组13.6 g/kg，高剂量组27.2 g/kg），西药组用卡托普利1 g/kg。于实验给药治疗6周后，检测各组大鼠血糖、体重、右肾指数，且通过光镜、透射电镜观察各组大鼠肾小球的病理改变。结果与空白对照组比较，假手术组各项指标检测均无明显差异（P>005）；模型组及各治疗组24 h尿蛋白量、血糖、右肾指数及体重均降低，差异有统计学意义（P<0.05）；HE、PAS染色及电镜下，模型组与各治疗组均出现不同程度的病理改变，其中模型组病理改变最明显，肾小球明显肥大、基底膜增宽、系膜区明显增生，毛细血管腔明显变窄，阳性物质明显增多，系膜基质明显增多，肾小球内毛细血管呈节段性硬化，毛细血管管腔狭窄，足细胞的足突融合、消失。与模型组比较，各治疗组24 h尿蛋白量、血糖、右肾指数均降低，差异有统计学意义（P<005），而体重虽有所改善，但差异无统计学意义（P>005）；HE、PAS染色及电镜下，各治疗组病理改变均有不同程度的减轻，其中壮通饮中剂量组减轻最为明显。而各治疗组之间，虽然壮通饮中剂量组各项检测指标及病理改变的减轻、改善程度最为明显，但与其他治疗组相比差异无统计学意义（P>005）。结论壮通饮可以改善DN大鼠的一般情况，减轻肾小球病理学改变，对DN大鼠的肾脏具有一定的保护作用。
　　【关键词】壮通饮；糖尿病肾病；肾小球；病理改变；实验研究
　　中图分类号：R285.5文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.01.001
　　糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）常见的严重微血管并发症，随着患者病情的发展，本病对肾脏具有不可逆的损害，终致肾功能衰竭及尿毒症，致死致残。伴同我国DM患病率的增长与人口老龄化的趋势[1]，潜在的DN患者数量也因此增加。壮通饮（ZTY）为民间壮药方，以壮医“人体三道两路”理论为基础，由扶芳藤、参三七和黄花倒水莲3味壮药组成，常用于治疗“啊肉甜水毒”（糖尿病肾病水肿）。临床已有应用壮通饮治疗高脂血症、脑梗死[2，3]等，我们就壮通饮对DN大鼠肾小球病理改变的影响进行实验研究，旨在为壮通饮临床治疗DN提供理论依据。1材料与方法1.1实验动物及分组SPF级纯种SD大鼠140只，雌雄各半，体重（200±20）g，鼠龄4个月，检疫合格，血糖正常，由广西医科大学动物实验中心提供（合格证编号：SCXK桂2009-000）。给予普通饲料、自由饮水，适应性饲养1周后，随机取10只为空白对照组，20只为假手术组，其余为造模组。参照模型制备和成模标准[4]，将假手术组与造模组皆以10%水合氯醛3.0 ml/kg腹腔注射麻醉，但假手术组仅切开皮层、肌层，不切除肾脏并缝合，而造模组结扎左肾门血管行左肾切除术并缝合，且于术后恢复2周后，禁食12 h，以2%链脲佐菌素 （STZ）溶液50 mg/kg，一次性腹腔注射造模。72 h后测尾静脉血糖，其值≥16.7 mmol/L即为造模成功。之后继续饲养1个月，造模组微量白蛋白>30 mg/d后，随机取30只为模型组，其余为治疗组（西药组和壮通饮低剂量组、中剂量组、高剂量组）各20只。各治疗组大鼠每日灌胃量为：壮通饮各组用壮通饮水煎液（低剂量组6.8 g/kg，中剂量组13.6 g/kg，高剂量组27.2 g/kg），西药组用卡托普利液（10 mg/kg）。模型对照组与假手术组大鼠：用0.5% CMCNa，按“100 g/ml”大鼠体重与灌胃体积比灌胃。空白组不予处理。各组大鼠自由饮水和标准饮食，每天9：00～10：00一次性灌胃，连续灌胃用药6周。
　　1.2实验药品及设备
　　1.2.1壮通饮水煎液及卡托普利液制备壮通饮水煎液：按中药饮片（广西柳州百草堂药业有限公司，批号：20131023）“扶芳藤∶黄花倒水莲∶参三七=6∶4∶3”的用药质量比称取，将三药一并加适量蒸馏水浸泡过夜（参三七打成粉末并纱袋包装），加热至沸腾，改用文火煎煮1 h，滤出药液，加水再次煎煮1 h，后将两次煎液合并，且浓缩至含生药为2.72 g/ml的壮通饮高剂量组浓度，然后依次取其适量体积，倍比稀释至含生药为1.36 g/ml、0.68 g/ml的壮通饮中剂量组、低剂量组浓度。卡托普利液：将卡托普利片（规格：25 mg/片，广东台城制药股份有限公司，批号：20130302）研磨成粉末，按1 mg/ml的浓度配制。上药均分装灭菌，4℃保存备用。
　　1.2.2其他实验药品与设备水合氯醛（成都市科龙化工试剂厂，批号：20130513）；链脲佐菌素（STZ，美国Sigma公司，批号：90513038）；目测尿蛋白试纸（广州市花都高尔宝生物技术有限公司，批号：20130717），尿蛋白定量测试盒（由右江民族医学院附属医院检验科提供）。日立7060全自动生化分析仪（由右江民族医学院附属医院检验科提供，型号：7600020）；安稳血糖仪（三诺生物传感股份有限公司）；HMIAS2000W高清晰度彩色医学图文分析管理系统（由右江民族医学院附属医院病理科提供，型号：LOGENEI）；透射电镜（TEM，由广西医科大学提供，型号：日立H7650）。
　　1.3实验方法
　　1.3.1一般情况的测定于末3次给药后，连续收集3次各组大鼠的24小时尿液，用于检测24 h尿蛋白量（24 h尿蛋白量=尿蛋白定量×24 h尿量）。于末次给药后，给各组大鼠称重并测尾静脉血糖，禁食 （不禁水 ）10 h，行10%水合氯醛3.5 g/kg腹腔注射麻醉，取出右肾，剥离被膜称右肾质量，计算右肾指数（即右肾质量与体重比，单位：mg/g）。
　　1.3.2肾小球病理改变观察取各组大鼠右肾，经肾门纵向剖开，用10%福尔马林固定50%的肾组织、经常规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切片，分别行HE、PAS染色，应用病理图像分析系统对各组大鼠肾小球的病理改变做光镜分析。取各组大鼠肾皮质1 mm3，常规透射电镜制作样本，超薄切片，应用日立H7650型透射电镜，放大倍数：10 000倍，常规观察肾小球病理改变并摄片。
　　1.4统计学方法采用SPSS 17.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组计量资料的比较采用ANOVA检验，进一步两两比较采用SNK检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1一般资料动物饲养过程中，假手术组死亡6只、模型组死亡16只、西药组死亡7只；壮通饮低剂量组、中剂量组、高剂量三组各死亡10只。死亡原因可能是感染、血糖过高，尤其是模型组无药物的治疗。

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