1.4.1不同浓度HTCC抗真菌活性的分析PDA培养基中加入HTCC醋酸缓冲液（pH5.0），使培养基中HTCC终浓度依次为0.0（对照，CK）、0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL。培养基中央贴直径6mm的菌饼，27℃培养，定时测量菌落直径，计算抑菌率（IR）。
　　1.4.2pH对HTCC抗真菌活性的影响配制pH为4.0、5.0、6.0、7.0的HTCC终浓度为0.5mg/mL的PDA培养基，贴菌饼培养5d，测定抑菌率。以不加HTCC的相同pH的PDA培养基为对照（CK）。
　　1.4.3金属离子对HTCC抗真菌活性的影响PDA培养基中分别加入HTCC醋酸缓冲液（pH5.0）和K+、Na+、Ca2+、Mg2+金属离子，使金属离子终浓度为1mmol/mL，HTCC终浓度为0.2mg/mL。贴菌饼培养7d，测定菌落直径，计算抑菌率。
　　1.4.4抑菌率计算抑菌率=（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-菌饼直径）×100%。
　　1.5HTCC抗植物病原真菌机理研究
　　取液体培养3d的C.arachidicola菌丝4g（湿重），用0.9%的NaCl溶液洗涤，悬浮于40mL磷酸缓冲液（pH7.2，含0.8mg/mLHTCC）中，27℃振荡温育。定时测定280nm和260nm的吸光值（A）。
　　1.6统计分析
　　所有试验均重复3次，数据处理采用SPSS软件辅助进行。
　　2结果与分析
　　2.1HTCC的结构特性与分析
　　2.1.1FT-IR分析结果壳聚糖在1651cm-1处的吸收峰为其分子中-NH2的弯曲振动峰[7]，此峰在HTCC中消失（图1），说明改性后的壳聚糖分子中的-NH2发生了改变；而HTCC在1483、1647cm-1处出现两个新的吸收峰（图1），分别表示HTCC分子中季铵基团中-CH3的变形振动峰和伸缩振动峰[8]。该结果说明壳聚糖中的-NH2被烷基取代，合成了HTCC。
　　2.1.21HNMR分析结果HTCC的氢核磁共振谱图中在δ=3.176处出现强吸收峰（图2），为HTCC分子中-N+（CH3）3上H-d的吸收峰[9]；在δ=2.720、4.498、2.502处出现了3个弱的吸收峰（图2），分别为HTCC支链上H-a、H-b、H-c的吸收峰[10]。氢核磁共振谱图进一步证实试验成功合成了HTCC。
　　2.2HTCC抗植物病原真菌活性
　　2.2.1不同浓度HTCC抗真菌活性HTCC对4种病原真菌均具有一定的抑制效果，并且随HTCC浓度的增加、作用时间的延长，抑菌率均有所提高（图3）。对于C.arachidicola，当所用HTCC的浓度为0.5mg/mL时，试验时间内最终的抑菌率达64.8%，而当HTCC的浓度为2.0mg/mL时，最终的抑菌率高达74.8%；对于B.berengriana，当HTCC的浓度为2.0mg/mL时，最终的抑菌率为71.8%。HTCC对R.solani、C.coccodes的抑制作用稍差，但当HTCC的浓度为2.0mg/mL时，最终抑菌率也超过50.0%。
　　2.2.2pH对HTCC抗真菌活性的影响不同pH下HTCC对4种真菌的抗菌效果见表1。对于C.arachidicola、B.berengriana，随pH增加，HTCC抗菌性增强。Qin等[11]的研究表明HTCC对E.coli、S.aureus在弱碱环境下的抗菌性优于弱酸环境，本研究对C.arachidicola、B.berengriana试验结果趋势与之相近。对于R.solani、C.coccodes则是在pH5.0时抑菌率较大。试验结果表明HTCC氨基组的正电荷并不是其发挥抗菌活性的惟一原因，HTCC抗菌性能可能与测试菌株自身对HTCC的敏感性及对pH的耐受程度有关系。
　　2.2.3金属离子对HTCC抗真菌活性的影响金属阳离子对HTCC抗真菌效果的影响见图4。由图4可见，金属离子的加入显著增强了HTCC对R.solani、C.coccodes、C.arachidicola的抗菌活性，尤其是二价阳离子Ca2+、Mg2+加入后HTCC的抑菌率高达100%。此外，对于R.solani、C.coccodes，在加入K+、Na+后HTCC的抑菌率也达到100%。而对于B.berengriana，K+、Na+的加入使HTCC的抑菌率不同程度地降低，Ca2+、Mg2+的加入使其抑菌率有所增加。金属离子对HTCC抗真菌活性的影响较大，适当选择添加离子，在较低浓度下可大幅提高HTCC抗植物病原真菌的性能。
　　2.3HTCC抗植物真菌机理

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